前言:一篇好文章的誕生,需要你不斷地搜集資料、整理思路,本站小編為你收集了豐富的免疫學(xué)的作用主題范文,僅供參考,歡迎閱讀并收藏。
目前各種呼吸睡眠障礙性疾病日益增多,最常見的呼吸睡眠障礙性疾病如失眠、睡眠呼吸暫停綜合征在我國患病率很高[1]。睡眠障礙疾病能對身體多個系統(tǒng)造成損害,能導(dǎo)致障礙、腎功能損害、心腦血管疾病、神經(jīng)精神疾病。準(zhǔn)確地診斷呼吸睡眠疾病及其類型并及時采取相應(yīng)治療措施就十分重要,多導(dǎo)睡眠儀(PSG)能夠準(zhǔn)確地診斷睡眠呼吸障礙疾病,并確定其類型。通過多導(dǎo)睡眠儀監(jiān)測確診睡眠呼吸障礙疾病,為醫(yī)生確診提供了充分的臨床依據(jù),進(jìn)而采取相應(yīng)的治療方案,為提高人民的生活質(zhì)量和延長壽命提供科學(xué)保障。我科室于2009年4月至2010年7月應(yīng)用PSG對196例疑有睡眠障礙疾病患者進(jìn)行了整夜睡眠或白天多次小睡的監(jiān)測,報告如下。
1資料與方法
1.1臨床資料:196例疑有睡眠障礙疾病患者,男性170例,女性26例,年齡4~70歲,均采用德國生產(chǎn)的EMBLAS4000多導(dǎo)睡眠監(jiān)測儀(PSG),進(jìn)行整夜睡眠監(jiān)測或白天多次小睡監(jiān)測。
1.2方法:在監(jiān)測專用房內(nèi)作PSG檢查,連續(xù)監(jiān)測7h。監(jiān)測腦電、眼動、口鼻氣流、鼾聲、心電、胸腹式呼吸、血氧飽和度及等,通過微型記錄儀進(jìn)行實時記錄、輸入電腦進(jìn)行處理、分析,給出結(jié)果。注意事項:做檢測前沐浴、理發(fā),監(jiān)測當(dāng)日午后禁飲咖啡及飲料,不得用鎮(zhèn)靜劑。所安裝的電極要粘牢,不易脫落,胸腹運動帶與胸壁相貼得體,松緊適度。
2結(jié)果
196例疑似睡眠呼吸障礙疾病中阻塞性呼吸睡眠暫停綜合征160例(81.6%),失眠患者26例,發(fā)作性睡病4例,不安腿綜合征[2]2例,反復(fù)發(fā)作性過度睡眠1例,癲癇3例(通過擴(kuò)展PSG腦電導(dǎo)聯(lián)發(fā)現(xiàn)癲癇棘波),其中阻塞性呼吸睡眠暫停綜合征中阻塞型低通氣119例(74.4%),混合型30例(18.8%),中樞性11例(6.9%)。在睡眠呼吸障礙疾病中阻塞性睡眠暫停綜合征占絕大多數(shù),而且對身體危害最大,在這里對此病的監(jiān)測結(jié)果做詳細(xì)分析,結(jié)果表明阻塞性睡眠暫停綜合征存在較大程度的血氧飽和度下降(中重度占83.1%)和呼吸紊亂(中重度占89.4%),血氧飽和度下降分為輕度、中度、重度,呼吸紊亂是指呼吸暫?;虿煌潭鹊臍饬飨陆怠K吆粑鼤和?yán)重程度的標(biāo)準(zhǔn)以呼吸暫停低通氣指數(shù)(AHI)來判斷。AHI是指睡眠中每小時呼吸暫停和低通氣的次數(shù)。輕度的呼吸暫停定義為AHI5~15次/h,中度為AHI15~30次/h,重度為AHI>30次/h[3]。監(jiān)測結(jié)果:呼吸紊亂:輕度17例,中度34例,重度109例;血氧飽和度下降:輕度27例,中度41例,重度92例。對160例阻塞性呼吸睡眠暫停綜合征中有解剖結(jié)構(gòu)異常的患者進(jìn)行手術(shù)治療30例,對無解剖結(jié)構(gòu)異常的給予配戴呼吸機(jī)治療130例,并追蹤觀察。阻塞性睡眠暫停綜合征經(jīng)配戴呼吸機(jī)治療后氣道通暢,鼾聲消失,睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)降至5次/h以下,血氧飽和度提高到90%以上,因而及時診斷、及時治療十分重要。
關(guān)鍵詞:風(fēng)濕免疫教學(xué)法;學(xué)生能力;培養(yǎng)
本研究特將以就業(yè)為導(dǎo)向的風(fēng)濕免疫教學(xué)法引入風(fēng)濕免疫內(nèi)科實習(xí)教學(xué)中,并探討其能力評分情況及教學(xué)方法滿意度的數(shù)據(jù)差異,詳情如下。
一、資料與方法
1.基礎(chǔ)資料
從醫(yī)院風(fēng)濕免疫內(nèi)科2015年2月~6月接收的實習(xí)學(xué)生中選取80名作為受試對象,利用隨機(jī)平衡序貫法分為觀察組和對照組。觀察組23名實習(xí)學(xué)生中有男生40名,女生17名,年齡在22~31歲之間,平均(28.7±1.6)歲;對照組40名實習(xí)學(xué)生中男生25名,女生15名,年齡21~31歲,平均(28.5±1.7)歲。兩組均為碩士學(xué)歷,均為風(fēng)濕免疫內(nèi)科實習(xí)學(xué)生,組間基礎(chǔ)資料數(shù)據(jù)比較無顯著性差異(P>0.05)。
2.方法
對照組接受常規(guī)的教學(xué)法,即由帶教老師帶領(lǐng)學(xué)生將專業(yè)理論知識與實踐操作相結(jié)合,向其詳細(xì)講解注意事項,并定期組織考核,鼓勵學(xué)生在實踐操作過程中向教師反饋發(fā)現(xiàn)的問題和疑問,教師應(yīng)當(dāng)向其詳細(xì)解釋處理方案和原因。觀察組接受以就業(yè)為導(dǎo)向的教學(xué)法,主要內(nèi)容為:首先,由帶教老師通過問卷調(diào)查、談話、匿名投票等方式了解學(xué)生今后的就業(yè)意向及規(guī)劃;其次,教師除了教授學(xué)生理論知識外,還應(yīng)當(dāng)在教學(xué)過程中適當(dāng)向?qū)W生介紹當(dāng)前的就業(yè)形勢,給予學(xué)生面對面的指導(dǎo),引導(dǎo)學(xué)生做好長期的職業(yè)規(guī)劃;再次,教師應(yīng)培養(yǎng)學(xué)生在今后臨床實踐過程中需要的能力和工作技巧,如護(hù)患溝通技巧、特殊病患的處理方案、病歷記錄書寫的注意事等;最后,在實踐教學(xué)過程中,教師要適當(dāng)穿插理論知識的講解。若學(xué)生遇到疑問,教師應(yīng)引導(dǎo)學(xué)生自主尋找解決問題的辦法和方案。
3.觀察指標(biāo)
教學(xué)時長均為1個月,教師于教學(xué)結(jié)束后采用百分制對兩組實習(xí)學(xué)生理論知識、醫(yī)患溝通技巧、實踐操作水平、問題解決能力等方面進(jìn)行評分,分值越高,說明教學(xué)成效越理想。兩組學(xué)生對教師的滿意度,分為非常滿意、滿意和不滿意,由學(xué)生自主評定,非常滿意和滿意構(gòu)成比之和即為總滿意率。
4.統(tǒng)計學(xué)方法
采用SPSS20.0軟件處理數(shù)據(jù)。量、等級和率分別采用t、非參數(shù)法和卡方檢驗,若P
二、結(jié)果
1.兩組評分比較
觀察組學(xué)生的理論知識、醫(yī)患溝通技巧、實踐操作水平、問題解決能力評分均遠(yuǎn)高于對照組,組間差異均具有顯著性(P
2.兩組教師滿意度的比較
觀察組非常滿意、滿意和不滿意者分別有32人、8人和0人,總滿意率為100.0%;對照組分別有21人、14人和5人,總滿意率為87.5%。組間滿意度分布及總滿意率比較差異均有顯著性(U=4.536,X2=5.207,P
三、討論
風(fēng)濕免疫科是近年來新興的科室,其疾病類型復(fù)雜多樣,患者發(fā)病機(jī)制、臨床表現(xiàn)和治療原理等方面的知識均比較瑣碎,并且內(nèi)容枯燥無味、難以理解。多數(shù)實習(xí)學(xué)生反映在風(fēng)濕免疫內(nèi)科實踐教學(xué)中對理論知識和實踐操作的理解程度并不理想,并且很多內(nèi)容往往靠死記硬背才能達(dá)到教學(xué)要求。因此,當(dāng)前的教學(xué)模式下仍然有很多風(fēng)濕免疫專業(yè)學(xué)生的能力達(dá)不到臨床實踐的要求,因而制約了醫(yī)療單位的服務(wù)質(zhì)量和發(fā)展水平。
以就業(yè)為導(dǎo)向的教學(xué)模式在風(fēng)濕免疫內(nèi)科實習(xí)教學(xué)中著重培養(yǎng)社會需要的多樣化人才,在提升學(xué)生專業(yè)知識水平和實踐操作能力的同時,還重視培養(yǎng)學(xué)生獨立解決問題的能力。在具體操作過程中,以就業(yè)為導(dǎo)向的教學(xué)法比傳統(tǒng)的教學(xué)模式成效更佳,優(yōu)勢也更為明顯。相關(guān)研究指出,在風(fēng)濕免疫科實習(xí)教學(xué)中引入以就業(yè)為導(dǎo)向的教學(xué)模式,有利于培養(yǎng)學(xué)生的興趣,提升教學(xué)成效。本研究中觀察組的評分和滿意度均明顯優(yōu)于對照組,這證明了該教學(xué)模式的有效性。綜上所述,筆者建議在風(fēng)濕免疫科實習(xí)中引入該教學(xué)模式,這不僅有助于培養(yǎng)學(xué)生的綜合能力,同時還可提升其滿意度和學(xué)習(xí)興趣,不失為一種理想的教學(xué)模式。
參考文獻(xiàn):
【關(guān)鍵詞】“教學(xué)做評用”一體化;平面設(shè)計;項目
1.引言
平面設(shè)計(graphic design),也稱作視覺傳達(dá)設(shè)計,是創(chuàng)造性思維與藝術(shù)表達(dá)的融合,以“視覺”作為溝通和表達(dá)的方式,運用符號、圖片、文字和色彩等視覺元素,通過多種表現(xiàn)方式創(chuàng)造出用來傳達(dá)觀念和信息的視覺表現(xiàn)。[1]
平面設(shè)計是我院計算機(jī)應(yīng)用技術(shù)專業(yè)的核心方向之一,課程主要涉及招貼設(shè)計、包裝設(shè)計、出版物排版等典型工作任務(wù),每門課程對應(yīng)學(xué)習(xí)掌握不同的設(shè)計軟件,每個項目要求在“教學(xué)做評用”一體化模式下完成富有創(chuàng)意、內(nèi)容豐滿、形式新穎的作品,達(dá)成設(shè)計任務(wù)。
2.“教學(xué)做評用”一體化教學(xué)模式的設(shè)計
我院平面設(shè)計類課程已經(jīng)開設(shè)多年,在教學(xué)中積累了豐富的教學(xué)經(jīng)驗,同時也發(fā)現(xiàn)了此類課程的教學(xué)弊端。
2.1 學(xué)生缺乏積極性
以往教學(xué)模式教學(xué)方法單一,教師演示學(xué)生模仿,沒有更好的監(jiān)管辦法。在教師演示時很難控制學(xué)生注意力、走神現(xiàn)象嚴(yán)重,等到操作時再查書上的步驟,失去了教師演示的意義,導(dǎo)致學(xué)生缺乏學(xué)習(xí)積極性,學(xué)習(xí)效果差。
2.2 不能學(xué)以致用
以往教學(xué)模式學(xué)生的工作任務(wù)主要來自于書本,書本上的設(shè)計任務(wù)完成了就是學(xué)會了,這就造成了學(xué)生只會模仿課本的例子,難于發(fā)揮想象力,操作技術(shù)不全面,不能承擔(dān)修改和變動的任務(wù),無法滿足用人單位的實際需求。
2.3 設(shè)計缺乏創(chuàng)意
創(chuàng)造性源于個人的積累,學(xué)生專業(yè)基礎(chǔ)參差不齊、人生閱歷淺、對藝術(shù)作品的鑒賞和感悟力低,這就要求教師的講解更加生動、教學(xué)內(nèi)容涉及范圍更加廣泛、教學(xué)形式更加多樣化、教學(xué)任務(wù)更加體現(xiàn)時代氣息和創(chuàng)造力。
針對這些弊端,課題組成員展開新一輪行業(yè)企業(yè)調(diào)研、畢業(yè)生調(diào)研和在校生調(diào)研,參考職業(yè)資格規(guī)范,重新梳理了平面設(shè)計教學(xué)模塊的課程體系、核心工作崗位及典型工作任務(wù),修訂了相關(guān)課程的課程標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)合“教學(xué)做”一體化教學(xué)模式,進(jìn)行整理歸納和反復(fù)推敲,提出“教學(xué)做評用”一體化教學(xué)模式改革方案。該模式在教學(xué)過程中以教師為主導(dǎo)、以學(xué)生為主體、以典型工作任務(wù)載體,師生共同完成教、學(xué)、做、評、用等教學(xué)環(huán)節(jié),實現(xiàn)提高學(xué)生鑒賞、創(chuàng)新和實踐能力的培養(yǎng)目標(biāo)。
3.“教學(xué)做評用”一體化教學(xué)模式的實現(xiàn)
3.1 教師教――教師主導(dǎo)
3.1.1 課程準(zhǔn)備
首先確定課程培養(yǎng)目標(biāo),分析相關(guān)企業(yè)工作崗位和典型工作任務(wù),確定引入課堂的教學(xué)項目,制定新型課程標(biāo)準(zhǔn)。要求教學(xué)項目來源于企業(yè)一線,教師每年每門課程至少開發(fā)2-4個教學(xué)項目,項目設(shè)定由簡單到復(fù)雜、由特殊到一般、由單一到綜合循序漸進(jìn)。根據(jù)教學(xué)項目的工作任務(wù),進(jìn)一步確定工作角色。大多數(shù)平面設(shè)計類項目都可以分為產(chǎn)品設(shè)計、素材采集與處理、產(chǎn)品制作、印前處理等任務(wù)流程,據(jù)此劃分不同角色,可供小組分配使用。
教學(xué)項目設(shè)計應(yīng)以工作過程為導(dǎo)向適度拓展教學(xué)內(nèi)容,即在項目實施中增加設(shè)計原理、表現(xiàn)技法、平面構(gòu)成、色彩構(gòu)成、文化內(nèi)涵、創(chuàng)意原則、運營模式等行業(yè)崗位應(yīng)知應(yīng)會的內(nèi)容,為學(xué)以致用打下基礎(chǔ)。[2]
教師積極建設(shè)課程資源,根據(jù)教學(xué)項目和教學(xué)模式編寫新型教材,本專業(yè)平面設(shè)計類課程已經(jīng)先后出版教材5本,結(jié)合實際崗位需求設(shè)計教學(xué)項目,包括實用性、趣味性、創(chuàng)新型教學(xué)項目20余個。不斷完善網(wǎng)絡(luò)課程資源,開發(fā)教學(xué)項目視頻、動畫、課件、講義、行業(yè)信息、參考資料等。博客、QQ、微信等多渠道與學(xué)生保持溝通無障礙,利用與學(xué)生的互動和信息反饋及時地為學(xué)生提供幫助和改善教學(xué)。
3.1.2 任務(wù)提出
課堂上,教師首先根據(jù)教學(xué)項目提出具體要求,任務(wù)流程和技能操作等不易說清的問題可使用教學(xué)視頻或錄屏視頻,并發(fā)放項目指南。每個教學(xué)項目都配有項目指南,介紹該項目的教學(xué)目標(biāo)、能力要求、角色分配、學(xué)習(xí)建議和學(xué)習(xí)進(jìn)度,提供教學(xué)資源、參考資料或相關(guān)網(wǎng)站,供學(xué)生分析和實施任務(wù)時使用。教師定期布置自主設(shè)計任務(wù),主題由學(xué)生自主確定、學(xué)生獨立實施并展示作品,提高獨立分析解決問題的能力。
3.1.3 任務(wù)分配
學(xué)生收到項目指南,熟悉項目具體要求以后,教師將精心設(shè)計的一個或多個情境化任務(wù)以小組為單位進(jìn)行任務(wù)分配并對任務(wù)分配情況進(jìn)行詳細(xì)登記,以便任務(wù)實施過程的跟蹤和落實。[3]
3.2 學(xué)生學(xué)――學(xué)生主體
3.2.1 任務(wù)領(lǐng)?。ㄟx?。?/p>
學(xué)生在明確項目具體要求后,以小組為單位領(lǐng)取任務(wù)或選取任務(wù),并參考項目指南中的角色劃分進(jìn)行角色任務(wù)領(lǐng)取,每個人需填寫角色任務(wù)單,小組組長需填寫小組任務(wù)單,任務(wù)單將記錄任務(wù)的完成過程和結(jié)果,并附有任務(wù)考核評價欄。
3.2.2 任務(wù)分析
學(xué)生收到角色任務(wù)單后,要對自身角色的主要任務(wù)進(jìn)行分析和討論,組長最終確定每個組員的角色任務(wù),制定整體項目解決方案,強(qiáng)化團(tuán)隊協(xié)作精神和口頭溝通能力的培養(yǎng),組長將根據(jù)角色任務(wù)難度及完成情況,給出組員小組考核成績分?jǐn)?shù)或名次。
3.3 師生共做
平面設(shè)計類教學(xué)項目的實施要特別注意作品的實用性、觀賞性和獨創(chuàng)性,充分發(fā)揮學(xué)生的想象力和創(chuàng)造力,教師指導(dǎo)不能一味要求“一致性”。
任務(wù)實施:
在教師指導(dǎo)下,每位組員制定自己的角色解決方案,完成具體的角色任務(wù)并進(jìn)行自評,之后與組內(nèi)其他成員的角色任務(wù)進(jìn)行連接,共同完成教學(xué)項目。組長組織進(jìn)行小組評價后,上交每位組員的角色任務(wù)單和小組任務(wù)單,準(zhǔn)備項目演示和答辯。各組在答辯中相互學(xué)習(xí)、取長補短,在小組互評和教師評價后,最終做出項目綜合評價。
在任務(wù)實施過程中,教學(xué)方法的運用尤為重要??鬃釉疲褐卟蝗绾弥撸弥卟蝗鐦分?。合適的角色、講究的教學(xué)方法,將激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,成為學(xué)生學(xué)習(xí)的強(qiáng)大動力。除了應(yīng)用常見的項目驅(qū)動、案例教學(xué)、小組討論、啟發(fā)式等教學(xué)方法外,還要著重使用趣味教學(xué)法和分層教學(xué)法,因材施教、有的放矢。
3.4 師生共評
課程評價由評價形式、評價范圍、評價方位形成師生全方位立體評價體系。
3.4.1 形式多元
評價方式由一元轉(zhuǎn)向多元,平面設(shè)計類課程特別適合過程考核、技能測試、作品展示、項目分析和設(shè)計、課程設(shè)計等多種形式評價學(xué)生。定期舉行作品展,將學(xué)生自主開發(fā)的作品進(jìn)行公開布展并講解,給學(xué)生搭建一個相互學(xué)習(xí)、提高鑒賞力和創(chuàng)新力的平臺,可給予一定獎勵或計分。
3.4.2 范圍多元
評價范圍由一元轉(zhuǎn)向多元,樹立以“綜合能力測試”為中心的現(xiàn)代考核和評價觀念,分別從職業(yè)能力、方法能力、社會能力等方面全面的評價學(xué)生。特別是學(xué)習(xí)態(tài)度、創(chuàng)新能力、團(tuán)隊協(xié)作等能力的考核,占總成績的比例有所提升。
3.4.3 方位多元
評價方位由一元轉(zhuǎn)向多元,分別從教師評價、自我評價、同伴評價、小組評價等多種方位公正客觀的評價學(xué)生。同時引入技能大賽考核機(jī)制,選拔部分學(xué)生參加校級、市級乃至國家級技能大賽,根據(jù)技能大賽的級別以及獲獎級別將給予不同等級的獎勵,并可申請免試。
3.5 師生共用
3.5.1 與其他課程模塊相結(jié)合
平面設(shè)計類課程要達(dá)到學(xué)以致用,還可以和其他模塊相結(jié)合。例如和網(wǎng)頁設(shè)計類、軟件設(shè)計類課程相結(jié)合,進(jìn)行網(wǎng)頁或軟件的界面設(shè)計,就可以合理其他模塊的產(chǎn)品布局、豐富產(chǎn)品內(nèi)容,提高產(chǎn)品質(zhì)量,增強(qiáng)產(chǎn)品效果?,F(xiàn)學(xué)院已開設(shè)界面設(shè)計課程,使平面設(shè)計類課程應(yīng)用到其他領(lǐng)域。
3.5.2 校企合作
加大校企合作力度,利用學(xué)院技能社團(tuán)和創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)工作室,積極參與社會設(shè)計項目投標(biāo),接受企業(yè)訂單,為作品明碼標(biāo)價,實現(xiàn)自我價值,這樣既有利于激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)作熱情,又有利于其在實踐中檢驗自己的創(chuàng)作水平[1]。我系已與多家企業(yè)達(dá)成合作意向,完成網(wǎng)頁維護(hù)項目3個,宣傳冊設(shè)計項目2個,裝幀設(shè)計項目2個,不僅提高了學(xué)生的設(shè)計水平,還創(chuàng)造了產(chǎn)值。
4.“教學(xué)做評用”一體化教學(xué)模式的效果
平面設(shè)計類課程應(yīng)用“教學(xué)做評用”一體化教學(xué)模式產(chǎn)生了良好的教學(xué)效果,它不僅發(fā)揮了“教學(xué)做”一體化教學(xué)模式的優(yōu)勢,實現(xiàn)了學(xué)生自主學(xué)習(xí),提高了學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性和主動性。同時,還增加了“評”和“用”,“評”使學(xué)生加入到評價機(jī)制中來,為學(xué)生創(chuàng)造了相互學(xué)習(xí)、開闊眼界的機(jī)會;“用”拓寬了專業(yè)發(fā)展方向,架通了學(xué)生和企業(yè)之間的橋梁,使學(xué)生學(xué)以致用,提高了教學(xué)質(zhì)量,為企業(yè)輸送大批優(yōu)秀人才。
參考文獻(xiàn)
[1]劉奕.對平面設(shè)計教學(xué)中創(chuàng)新能力培養(yǎng)的思考[J].美術(shù)教育研究.2014(03):146-147.
[2]胡北辰.創(chuàng)新教育在平面設(shè)計課程教學(xué)中的研究與實踐[J].福建電腦.2014(03):185-186.
[3]趙家敏.“教學(xué)做評一體化”任務(wù)型教學(xué)設(shè)計與實踐[J].吉林廣播電視大學(xué)學(xué)報.2014(01):105-106.
【摘要】 目的:探討補腎活血中藥對小鼠自身免疫性卵巢功能早衰(premature ovarian failure, POF)的防治作用。方法:以BALB/c雌性小鼠卵巢組織制備卵巢抗原,皮下和兩后腳掌多點注射免疫同種雌性小鼠建立卵巢早衰模型。分別在第1次免疫以及第3次免疫后給予補腎活血中藥,灌服中藥后分析陰道脫落細(xì)胞涂片,酶聯(lián)免疫法檢測外周血雌二醇(estradiol, E2)、卵泡刺激素(folliclestimulating hormone, FSH)以及黃體生成素(luteinizing hormone, LH)濃度。結(jié)果:POF小鼠卵巢間質(zhì)可見淋巴細(xì)胞浸潤,外周血FSH和LH升高,E2下降明顯(P
【關(guān)鍵詞】 卵巢功能早衰; 中草藥制劑; 小鼠
Objective: To investigate the preventive effect of Bushen Huoxue Recipe (BSHXR), a compound traditional Chinese herbal medicine, on autoimmune premature ovarian failure (POF) in mice.
Methods: Ovarian antigen was prepared with the ovarian tissue of female BALB/c mice. A mouse model of POF was established by immunization injection of the ovarian antigen of isotype female mice on multiple subcutaneous sites and two posterior soles. The POF mice were treated with BSHXR after the first and third immunization. The levels of folliclestimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH) and estradiol (E2) in peripheral blood were detected by enzyme linked immunosorbent assay.
Results: Lymphocyte infiltration was appeared in ovarian stroma of POF mice. The levels of FSH and LH were evaluated and the E2 level was decreased significantly (P
Conclusion: BSHXR can recover ovarian function in POF mice mainly by regulating the indiscriminate hormone level, and BSHXR has preventive effect on autoimmune POF in mice.
Keywords: ovarian failure, premature; herbal preparations; mice
卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是一類嚴(yán)重影響婦女生殖健康及身心健康的疾病?;颊哂?0歲前出現(xiàn)閉經(jīng),伴烘熱、汗出、煩躁等低雌激素癥狀,并常伴隨其他內(nèi)分泌自身免疫疾患,故其治療比較困難。POF的發(fā)病率為1%~3%,占繼發(fā)性閉經(jīng)的10%~20%[13]。由于病因不明,治療頗為棘手,尚無有效措施,尤其對于特發(fā)性或自身免疫性卵巢功能衰竭的患者而言,如何減緩卵巢功能衰退的速度以恢復(fù)卵巢功能,提高生活質(zhì)量,是目前生殖內(nèi)分泌臨床研究的一項重要課題。
本研究用BALB/c雌性小鼠卵巢組織制備卵巢抗原,皮下和兩后腳掌多點注射免疫同種雌性小鼠建立卵巢早衰模型。分別在第1次免疫以及第3次免疫后給予補腎活血中藥,檢測生殖內(nèi)分泌及卵巢形態(tài)學(xué)改變,探討補腎活血方(Bushen Huoxue Recipe,BSHXR)防治POF的作用機(jī)制,為臨床運用中藥治療POF提供理論及實驗依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.1.1 實驗動物 SPF級BALB/c雌性小鼠200只,體質(zhì)量15~20 g,由上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。動物合格證號為SYXK(滬)20042005。
1.1.2 藥物及試劑 補腎活血方由仙靈脾15 g、巴戟天15 g、覆盆子15 g、菟絲子15 g、蛇床子10 g、石楠葉10 g、枸杞子15 g、黨參15 g、黃芪20 g、當(dāng)歸15 g、川芎10 g等組成,由上海中醫(yī)藥大學(xué)岳陽醫(yī)院制劑室采用醇提法制作成合劑(相當(dāng)于含生藥2.5 g/ml)。卵泡刺激素(folliclestimulating hormone, FSH)、黃體生成素(luteinizing hormone, LH)及雌二醇(estradiol, E2)小鼠ELISA試劑盒為美國R&B公司生產(chǎn)。弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant, CFA)和弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant, IFA)購自美國Sigma公司。
1.1.3 儀器 JY922Ⅱ型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新藝科器研究所),Sigma Diagnosis酶標(biāo)儀(美國Sigma公司生產(chǎn))。
1.2 實驗方法
1.2.1 卵巢抗原制備 收集BALB/c雌性小鼠卵巢組織,稱質(zhì)量、洗凈,于TrisHCl緩沖液中剪碎并研磨成勻漿,低溫下超聲粉碎5 min,低溫離心(4 000 r/ min,15 min;10 000 r/min,5 min),取上清液。調(diào)整濃度,使每0.1 ml含卵巢組織20 mg。
1.2.2 造模方法 參考文獻(xiàn)[4]制作POF模型,按每只小鼠10 mg(0.05 ml)卵巢抗原皮下多點注射免疫BALB/c雌性小鼠,建立POF模型。連續(xù)3次,每2周1次,第1次免疫加入等量CFA,第2、3次免疫加入等量IFA。
1.2.3 動物分組及給藥 小鼠常規(guī)喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料,采用隨機(jī)數(shù)字表將80只小鼠分為正常組、模型組、預(yù)防組和治療組,每組20只。預(yù)防組于第1次免疫后開始給藥,共給藥7周。治療組于第3次免疫后開始給藥,共給藥3周。正常組及模型組均灌胃等量生理鹽水,每周休息1 d。藥物劑量按小鼠與人體表面積轉(zhuǎn)換系數(shù)計算后,每只小鼠每天灌胃0.5 ml。所有動物在造模后7周(動物處死時)取材,正常組也于此時取材。
1.2.4 陰道脫落細(xì)胞檢測 每天下午4時各組固定取3只小鼠陰道脫落細(xì)胞做涂片,置光學(xué)顯微鏡下觀察其動情周期變化。
1.2.5 血清FSH、LH及E2檢測 小鼠摘眼球采血,離心,取血清,按試劑盒說明書操作要求,采用酶聯(lián)免疫測定法測定FSH、LH和E2含量。
1.2.6 卵巢組織形態(tài)學(xué)觀察 稱取卵巢質(zhì)量后,福爾馬林固定,梯度酒精脫水,石蠟包埋,切片,脫蠟,常規(guī)HE染色,置光學(xué)顯微鏡下觀察。
1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料均數(shù)用x±s表示,多組間比較采用單因素方差分析q檢驗,即NewmanKueuls法。
轉(zhuǎn)貼于
2 結(jié)果
2.1 陰道脫落細(xì)胞涂片 小鼠性周期一般為4~5 d,包括動情前期、動情期、動情后期和動情間期。在第1次免疫后,除正常組外,各組小鼠周期均不規(guī)則,表現(xiàn)為動情期和動情間期延長。第3次免疫后,模型組小鼠表現(xiàn)為動情間期延長,漸至無動情周期,動情間期有白細(xì)胞,可見上皮細(xì)胞相混雜。中藥治療組表現(xiàn)為動情周期紊亂,動情間期明顯延長。預(yù)防組仍有動情周期性變化,但動情期角化細(xì)胞數(shù)減少,動情周期延長8~10 d。
2.2 卵巢形態(tài)學(xué)變化 光鏡下模型組見發(fā)育卵泡及成熟卵泡數(shù)明顯減少,顆粒細(xì)胞排列紊亂,卵巢間質(zhì)可見淋巴細(xì)胞浸潤。中藥治療組發(fā)育卵泡數(shù)較之略多,而預(yù)防組可見到較多的生長卵泡及成熟卵泡。見圖1。
2.3 補腎活血方對POF小鼠FSH、LH和E2含量的影響 模型組小鼠E2含量明顯低于正常組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
圖1 卵巢組織形態(tài)學(xué)特征(光學(xué)顯微鏡,×40)(略)
Figure 1 Morphology characteristics of ovarian tissue (Light microscope, ×40)
A: Normal group; B: Untreated group; C: Prevention group; D: BSHXRtreated group.
表1 各組小鼠FSH、LH和E2含量(略)
Table 1 Levels of FSH, LH and E2 in mice in different groups
*P
3 討論
POF究其臨床癥狀與“月水先閉”、“經(jīng)水早斷”等相類,歸屬于中醫(yī)閉經(jīng)、早發(fā)絕經(jīng)、經(jīng)斷前后諸癥及不孕癥等范疇。中醫(yī)辨證屬于腎虧血瘀。故本研究采用補腎活血作為治療原則,仙靈脾、巴戟天、蛇床子取其溫補腎陽之效,覆盆子、菟絲子、枸杞子取其補腎填精之義,黨參、黃芪、川芎、當(dāng)歸、石楠葉共奏健脾養(yǎng)血活血之功?,F(xiàn)代藥理研究表明,溫腎陽中藥有類雌激素樣作用,通過調(diào)節(jié)下丘腦垂體卵巢軸,促進(jìn)卵泡、子宮發(fā)育,使子宮、卵巢重量增加。仙靈脾、巴戟天等均有促卵泡發(fā)育,提高雌激素水平,增加子宮內(nèi)膜雌、孕激素受體含量等作用。而當(dāng)歸、枸杞子、黨參含有多糖、多種氨基酸及人體必須的多種微量元素,可增強(qiáng)機(jī)體免疫力。菟絲子、覆盆子等補腎中藥能使不孕大鼠垂體降低過高的LH含量,提高垂體的反應(yīng)性[57]。
本研究采用BALB/c雌性小鼠卵巢組織制備卵巢抗原,皮下和兩后腳掌多點注射免疫同種雌性小鼠建立POF模型。我們分別在建模過程中(第1次免疫后)灌服中藥,以及建模后(第3次免疫后)給予中藥,旨在觀察中藥對POF小鼠的預(yù)防及治療作用。我們發(fā)現(xiàn)中藥治療后,小鼠動情周期紊亂,動情間期明顯延長,預(yù)防組動情周期延長,動情期角化細(xì)胞數(shù)減少,但仍有動情周期性變化。卵巢形態(tài)學(xué)顯示預(yù)防組卵巢大體正常,可見到較多的生長卵泡及成熟卵泡,而中藥治療組卵巢稍有萎縮,卵巢間質(zhì)可見淋巴細(xì)胞浸潤。從生殖內(nèi)分泌激素來看,預(yù)防組血清E2含量增高(P
參考文獻(xiàn)
1 Orshan SA, Furniss KK, Forst C, et al. The lived experience of premature ovarian failure. J Obstet Gynecol Neonatal Nurs. 2001; 30(2): 202208.
2 Pasquali EA. The impact of premature menopause on women's experience of self. J Holist Nurs. 1999; 17(4): 346364.
3 Yan J, Wang T. Study on premature ovary failure etiology and the treatment with combined traditional ChineseWestern medicine. Tianjin Yao Xue. 2006; 18(3): 6668. Chinese with abstract in English.
閆潔, 王濤. 卵巢早衰的病因及中西醫(yī)結(jié)合治療的研究. 天津藥學(xué). 2006; 18(3): 6668.
4 Lin JH, Yan JH, Lin QD, et al. Determination of cellular and humoral immunity in mice of autoimmune ovarian failure. Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. 1998; 33(12): 735736. Chinese with abstract in English.
林建華, 嚴(yán)雋鴻, 林其德, 等. 自身免疫性卵巢功能衰退小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的測定. 中華婦產(chǎn)科雜志. 1998; 33(12): 735736.
5 Cheng BB, Zhu L, Li CZ, et al. Effect of Zuogui pill on reproductive endocrine of female Yindeficiency mice. Xian Dai Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2003; 12(13): 13621364. Chinese with abstract in English.
程彬彬, 朱玲, 李, 等. 左歸丸對雌性小鼠陰虛模型生殖內(nèi)分泌的影響. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2003; 12(13): 13621364.
6 Shen W, Yu CQ. Treating premature ovarian failure by reinforcing kidney. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2006; 4(6): 653656. Chinese with abstract in English.
沈慰, 俞超芹. 從腎論治卵巢早衰.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報. 2006; 4(6): 653656.
7 Yang ZW, Tan ZY, You ZL, et al. Treatment of polycystic ovary syndrome by tonifying kidney and promoting blood circulation. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2006; 4(4): 422424. Chinese with abstract in English.
楊正望, 談?wù)滂ぃ?尤昭玲, 等. 補腎活血法治療多囊卵巢綜合征臨床觀察. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報. 2006; 4(4): 422424.
【關(guān)鍵詞】 黃芪 肝損傷 小鼠
Abstract:Objective To investigate the protective effects of Compound Astragalus Extract (CAE) on liver injury in mice. Methods The acute liver injury models were induced by D-galactosamine (D-GalN, 800 mg/kg, ip) and Bacillus Calmette Guerin (BCG,1×107/0.2 mL, iv) plus Lipopolysaccharide (LPS 7.5 μg/0.2 mL, iv) in mice. ALT, AST, MDA content in liver homogenate were assayed by sepctrophotometry. IL-1 activity and ConA-induced splenocytes proliferation were detected by [3H] TdR incorporation assay. TNF-α activity was determined by assay of cytotoxicity against L929 cell. Results CAE (60, 120, 240 mg/kg) could obviously lower the elevated liver index, ALT level in serum and MDA content in liver homogenate in D-GalN mice and in the immunological liver injury mice. It also decreased ALT, AST level in serum, recovered ConA-induced splenocytes proliferation. It had inhibitory effect on inflammatory factors TNF, IL-1 secreted by PMφs. Conclusion CAE showed significant protective effects on chemical and immunological liver injury in mice.
Key words:CAE;liver injury;mice
黃芪始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,具有補氣升陽、固表止汗等功效[1]。現(xiàn)代臨床研究認(rèn)為,黃芪粗制劑對慢性肝炎均有較好的療效,使大鼠肝纖維化程度明顯減輕[2]。我們多年的研究還發(fā)現(xiàn),黃芪總苷有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡以及抗肝纖維化等作用[3-6]。由此,根據(jù)臨床經(jīng)驗并結(jié)合中醫(yī)理論,提取與分離了黃芪有效部位群(黃芪多糖、皂苷、酮及酚),再依據(jù)體外正交實驗結(jié)果首次組成黃芪多部位組合(compound astragalus extract,CAE)。本實驗進(jìn)一步對其抗小鼠肝損傷進(jìn)行研究。
1 實驗材料
1.1 動物與細(xì)胞株
昆明種小鼠,雄性,6~8周,體重(18±2)g;C57BL/6J小鼠,雄性,6~8 周,體重(20±2)g;均購于安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心(合格證號:皖醫(yī)實動準(zhǔn)字01號)。小鼠成纖維細(xì)胞瘤(L929)細(xì)胞株:南京軍事醫(yī)學(xué)研究所朱敏生教授惠贈。
1.2 藥物與試劑
CAE,合肥恒星醫(yī)藥研究所提供,批號20030508;研缽碾為細(xì)粉,0.5%羧甲基纖維素鈉溶液(CMC-Na)混懸。護(hù)肝片,黑龍江五??ㄋ帢I(yè)有限公司產(chǎn)品,批號20041016;卡介苗(BCG),上海生物制品有限公司產(chǎn)品,用前以滅菌生理鹽水配成所需濃度;D-氨基半乳糖胺(D-GalN)重慶醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程研究室,批號020327;硫代巴比妥酸(TBA),上海化學(xué)試劑公司;谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒,上海榮盛生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;[3H]TdR比放射性為37 MBq/mL,中國原子能研究院同位素研究所產(chǎn)品;新生小牛血清(NBS),杭州四季清生物制品公司產(chǎn)品;RPMI-1640培養(yǎng)粉,美國Gibco公司產(chǎn)品;脂多糖(LPS)、Hepes、刀豆蛋白A(ConA)均為美國Sigma公司產(chǎn)品。
1.3 儀器
Napco-6100型CO2培養(yǎng)箱,美國杜邦公司產(chǎn)品;YJ-1450型醫(yī)用凈化工作臺,蘇凈集團(tuán)安泰公司制造;LDR4-8.4低溫離心機(jī),北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn);XSZ-D倒置顯微鏡,重慶光學(xué)儀器廠產(chǎn)品;GL20A全自動高速冷凍離心機(jī),湖南儀器儀表總廠離心機(jī)廠;LS-6500型液體閃爍計數(shù)儀,美國Beckman公司產(chǎn)品;內(nèi)切式組織勻漿機(jī),浙江機(jī)械廠產(chǎn)品。
2 實驗方法
2.1 D氨基半乳糖胺誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的建立及處理[7]
昆明種小鼠60只,隨機(jī)平均分組:正常組、模型組、CAE 3個劑量組(60,120,240 mg/kg)和護(hù)肝片組(800 mg/kg)。灌胃給藥或溶媒,1次/d,共7 d,腹腔注射D-GalN 800 mg/kg,給藥容積0.1 mL/10 g,正常對照組腹腔注射等量的生理鹽水。造模后24 h眼眶采血、摘取肝臟,進(jìn)行血清ALT、肝勻漿丙二醛(MDA)的測定。
2.2 卡介苗+脂多糖誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷模型的建立及處理[8]
昆明種小鼠60只,隨機(jī)平均分組(同上)。造模第1天每鼠尾靜脈注射給予BCG 2.5 mg/0.2 mL(5×107菌體)。正常鼠尾靜脈注射0.2 mL生理鹽水,2 h后灌胃給藥或溶媒,連續(xù)12 d。第12天每鼠靜脈注射LPS 7.5 μg/0.2 mL,禁食12 h。眼眶采血供ALT、AST的測定;同時進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測及腹腔巨噬細(xì)胞的培養(yǎng),收上清供腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與白細(xì)胞介素-1(IL-1)的檢測。
2.3 指標(biāo)檢測
2.3.1 血清ALT、AST檢測
采用賴氏法,按試劑盒說明書步驟操作。
2.3.2 肝勻漿MDA測定[9]
采用TBA比色法。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本含量,結(jié)果以nmol/g表示。
2.3.3 ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的測定[10]
采用[3H]TdR摻入法。常規(guī)制備1×1010/L C57BL/6J小鼠脾細(xì)胞懸液,加入96孔板,每孔100 μL;再加含ConA(終濃度5 mg/L)的10%小牛血清RPMI 1640培養(yǎng)液100 μL。設(shè)3個復(fù)孔,37 ℃、5% CO2培養(yǎng)48 h。終止培養(yǎng)前6 h,加[3H]TdR 20 μL(終濃度370 bq/mL),培養(yǎng)結(jié)束后,收集細(xì)胞,液閃計數(shù)儀測dpm值。
2.3.4 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PMΦs)分泌TNF-α及IL-1活性的檢測
參照文獻(xiàn)[11-12]方法,分別采用小鼠L929殺傷法和小鼠[3H]TdR摻入法。
2.4 統(tǒng)計學(xué)方法
各組數(shù)據(jù)均以—x±s表示,組間比較用SPSS11.5軟件進(jìn)行t檢驗。
3 結(jié)果
(見表1~表3)表1 CAE對D-GalN誘導(dǎo)的小鼠肝損傷血清ALT、肝勻漿MDA及肝指數(shù)的影響(略)注:與正常組比較,##P
4 討論
我們前期體外研究結(jié)果表明,黃芪多糖、皂苷、酮及酚等4個有效部位均能不同程度的抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-1、TNF-α及NO的水平。依據(jù)體外實驗(正交設(shè)計)組成的CAE在11.3~90 mg/L濃度范圍內(nèi)同樣對LPS誘導(dǎo)的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生上述炎癥因子有明顯的抑制作用[13]。但CAE對急性肝損傷小鼠有無作用?本實驗首先采用了類似人類病毒性肝炎的D-GalN化學(xué)性肝損傷模型[7],結(jié)果表明,口服不同劑量CAE(60、120、240 mg/kg)均能明顯降低D-GalN升高的血清ALT的水平、肝臟指數(shù)及肝勻漿MDA的含量,表明CAE對D-GalN性肝損傷有保護(hù)作用,提示CAE的抗氧化和抗炎作用可能是其抗肝損傷作用的機(jī)制之一。
早期的研究發(fā)現(xiàn),許多慢性肝炎患者存在諸多抗體,從而認(rèn)為病變遷延不愈的本質(zhì)可能與免疫有關(guān),于是人們采取了多種方法建立了免疫性肝損傷模型[14]。BCG+LPS是常用的免疫性肝損傷模型。BCG可使多形核中性細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞聚集于肝臟,其后用低劑量LPS攻擊,可激發(fā)這些細(xì)胞釋放一些對肝細(xì)胞有毒性作用的炎癥介質(zhì)如氧自由基、白三烯和細(xì)胞因子TNF-α、IL-1等,從而造成類似人類肝病免疫性肝損傷[8,15]。它是篩選保肝藥物的一種可靠的免疫性肝損傷模型。本實驗成功地復(fù)制了BCG+LPS免疫性肝損傷模型。研究表明,CAE使小鼠升高的血清ALT、AST水平降低,而且明顯上調(diào)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng),恢復(fù)低下的免疫功能,表明CAE對小鼠免疫性肝損傷有明顯的保護(hù)作用和免疫調(diào)節(jié)作用,并提示CAE對小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用可能與其免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)。
TNF-α主要是由激活的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種內(nèi)源性細(xì)胞因子,具有廣泛而重要的生物學(xué)作用,肝臟中大量枯否細(xì)胞(KC)的增生活躍是TNF-α水平增加的基礎(chǔ)。國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為,TNF-α與病毒性肝炎關(guān)系密切,是引發(fā)急性肝壞死的重要介質(zhì)[16]。TNF-α又可作為肝損傷的第一介質(zhì),引起許多與肝損傷有關(guān)的第二介質(zhì)的出現(xiàn),如IL-1、IL-6、IL-8及蛋白酶的產(chǎn)生[17]。而IL-1也是由激活的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的另一種內(nèi)源性細(xì)胞因子,它加強(qiáng)TNF-α的肝損傷程度[18],因此,本實驗檢測了PMΦs分泌TNF-α和IL-1的含量。結(jié)果表明CAE對BCG+LPS過度激活的小鼠PMΦs產(chǎn)生TNF-α、IL-1有明顯的下調(diào)作用。結(jié)合體外CAE直接抑制PMΦs分泌TNF-α、IL-1研究結(jié)果,推測CAE抗免疫性肝損傷作用可能與其抑制TNF-α、IL-1等炎癥因子有關(guān)。但CAE是否直接抑制肝中的KC分泌TNF-α、IL-1等炎性因子,值得進(jìn)一步深入研究。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 卞如濂.抗炎免疫藥理與臨床應(yīng)用[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué),北京協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1992.280-282.
[2] 馬 紅,王保恩.黃芪對肝纖維化治療作用的實驗研究[J].中華肝臟病雜志,1997,5(1):32-33.
[3] 楊 沁,路景濤,王 斌,等.黃芪總苷的抗炎作用及其作用機(jī)制探討[J].中國臨床藥理及治療學(xué),2001,6(1):21-24.
[4] 宋少剛,楊 雁,路景濤,等.黃芪總苷抗肝纖維化作用及其機(jī)制[J].中國藥理學(xué)通訊,2000,17(4):9.
[5] 曹正中,陳敏珠,李常玉,等.黃芪總提物對佐劑性關(guān)節(jié)炎的抗氧化作用[J].中國臨床藥理學(xué)及治療學(xué),2000,5(3):224-226.
[6] 楊 雁,陳敏珠.黃芪總苷對肝癌細(xì)胞凋亡及WTP53基因表達(dá)的影響[J].中國藥理學(xué)通報,2001,17(4):447-451.
[7] 徐叔云,卞如濂,陳 修.藥理實驗方法學(xué)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002.1346-1349.
[8] Wang GS,Liu GT.Role of nitric oxide in immunological liver injury in mice[J].Biochem Pharmacol,1990,39(9):1277-1281.
[9] Ohkawa H,Ohishi N,Yagi K.Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction[J].Anal Biochem,1979,
5:351-353.
[10] 王 斌,陳敏珠,徐叔云.白芍總甙對佐劑性關(guān)節(jié)炎滑膜功能和脾細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,1994,8(2):128-132.
[11] 楊貴貞.免疫工程綱要與技術(shù)[M].長春:吉林科學(xué)出版社,1991.205-212.
[12] 梁君山,魏 偉,周愛武,等.白細(xì)胞介素-1的檢測及白勺總苷對其產(chǎn)生的影響[J].中國藥理學(xué)通報,1989,5(6):353-357.
[13] 路景濤,陳敏珠.黃芪多部位組合對細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、NO及IL-1的影響[J].安徽醫(yī)藥,2006,10(5):330-331.
[14] Uibo RM, Helin HJ. Immunological reactions to liver-specific membrance lipoprotein(LSP) in experimental autoimmune liver disease in rabbits[J].Ibid,1982,48:505-508.
[15] 王根生.一氧化氮和腫瘤壞死因子在小鼠免疫性肝損傷中的作用及抗肝炎新藥SY-801和SY-640的影響[J].生理科學(xué)進(jìn)展,1996,27:47-49.
[16] 張慧琴,姚志強(qiáng),周永興,等.腫瘤壞死因子在實驗性急性肝壞死中的作用[J].臨床肝膽病雜志,1994,10(4):19-21.
【關(guān)鍵詞】 免疫 肝損傷 淋巴細(xì)胞亞群 大蒜多糖C 流式細(xì)胞術(shù)
Abstract:ObjectiveTo observe the changes of lymphocyte subsets in the peripheral blood of mice with immunological liver injury and intervention of Garlic Polysaccharide C. MethodsThe animal immunological liver damage model was reproduced by injection via the tail vein of BCG (Bacilli Calmette Guein)and lipopolysaccharide(LPS) into mice.The peripheral-blood lymphocyte subsets' percentages and the CD4+/CD8+ ratio was measured by the flow cytometry.ResultsCompared with normal control group, the percentages of the T lymphocyte and the CD8+ T lymphocyte in the peripheral-blood in immunological liver damage mice siginificantly increased(P< 0.01),however, the percentages of the B lymphocyte, CD4+T lymphocyte and the ratio of CD4+/CD8+ decreased(P
Key words:Immunity; Liver injury; Lymphocyte subset; Garlic polysaccharide C; Flow cytometry
病毒性肝炎的損害與機(jī)體的免疫應(yīng)答有密切的關(guān)系[1]??ń槊缏?lián)合脂多糖(BCG+LPS)誘導(dǎo)的免疫性肝損傷是研究病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制及藥物防治的有效實驗?zāi)P停?,3],此模型中小鼠外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化特征尚無定論。 大蒜藥食同源,近來我們從大蒜球根中提取分離出新的安全低毒有效成分大蒜多糖C,并證實大蒜多糖C在體外有抗乙型肝炎病毒作用,對四氯化碳所致化學(xué)性及BCG+ LPS誘導(dǎo)的免疫性肝損傷小鼠肝功能均具保護(hù)性作用[3~5]。為此,本研究則進(jìn)一步觀察BCG+LPS免疫性肝損傷小鼠外周血淋巴細(xì)胞亞群變化并研究大蒜多糖C的干預(yù)作用,以探討大蒜多糖C護(hù)肝作用的相關(guān)免疫機(jī)制,尋求有效的抗病毒性肝炎藥物。
1 材料和方法
1.1 主要藥品及試劑大蒜多糖C:參照文獻(xiàn)方法提取及純化,純度為92.3%[3~5]??ń槊纾˙CG)活菌:蘭州生物制品研究所產(chǎn)品,凍干粉劑,批號:20020501,使用前用滅菌生理鹽水配制成1%的溶液。脂多糖(LPS): SIGMA公司產(chǎn)品。小鼠單克隆抗體: FITC標(biāo)記CD3試劑、PE標(biāo)記CD19試劑、PE標(biāo)記CD4試劑、PE標(biāo)記CD8試劑以及相應(yīng)同型對照,均為Caltag公司產(chǎn)品。流式鞘液及溶血劑(Immuno-Prep)均由Beckman Coulter公司提供。
1.2 動物與儀器健康雄性昆明小鼠,體重22~25g,由湖北醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供,適應(yīng)1周后開始實驗。主要儀器:美國Beckman Coulter公司 EPACS XL流式細(xì)胞儀。
1.3 動物模型、分組、標(biāo)本采集及制備采用卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)誘發(fā)的小鼠免疫性肝損傷模型,即小鼠先尾靜脈注射1% BCG活菌2 mg/只致敏,12 d后再尾靜脈注射微量LPS(4μg/只)誘導(dǎo)肝損傷。小鼠隨機(jī)分為正常對照組、免疫性肝損傷模型組、大蒜多糖C治療組(800 mg/kg ig,qd×12),每組20只。實驗第1天,模型組及大蒜多糖C治療組每只小鼠尾靜脈注射1% BCG溶液2 mg即0.2 ml,正常對照組尾靜脈注射生理鹽水(0.2 ml/只)。次日起,正常組和模型組ig生理鹽水qd×12;大蒜多糖C組 ig 800 mg/kg qd×12。末次給藥后,模型組、大蒜多糖C治療組每只小鼠尾靜脈注射LPS 4 μg,正常對照組給予等容積無菌生理鹽水。12 h后,小鼠摘眼球取血,收集于肝素抗凝管中備測。
1.4 外周血淋巴細(xì)胞亞群比值測定應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測。采用淋巴細(xì)胞亞群雙色分析方案,按照儀器和檢測試劑說明書進(jìn)行。取待測肝素抗凝血樣本100 μl,分別加入相應(yīng)抗小鼠抗體或同型IgG對照10 μl,室溫避光孵育20 min,加入溶血素溶解紅細(xì)胞后,1 000 r/min,離心5 min,棄上清液,用1ml 0.001M的PBS重新懸浮細(xì)胞,200目過濾網(wǎng)過濾樣本后上機(jī)檢測。
1.5 統(tǒng)計學(xué)分析實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( ±s)表示,兩組間比較用t檢驗。
2 結(jié)果
結(jié)果見表1。與正常對照組相比,模型組T淋巴細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞百分比值明顯升高(P< 0.01),B淋巴細(xì)胞百分比值、CD4+/CD8+比值明顯下降(P< 0.01),CD4+T細(xì)胞百分比值也有減少(P< 0.05),NK1.1+T細(xì)胞百分比值無顯著變化。大蒜多糖C治療組T,B,CD4+T,CD8+T淋巴細(xì)胞百分比較模型組均明顯下降(P< 0.01),甚至低于正常組水平(P< 0.05或P
表1 大蒜多糖C對小鼠外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響(略)
與對照組比較,*P< 0.05, **P< 0.01; 與模型組比較,##P< 0.01;n=10
3 討論
淋巴細(xì)胞是存在于體內(nèi)的一種單核細(xì)胞,是機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要構(gòu)成成分之一。根據(jù)細(xì)胞功能不同,淋巴細(xì)胞主要分為T淋巴細(xì)胞(CD+3)和B淋巴細(xì)胞(CD+19)兩大類,T淋巴細(xì)胞主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫,B淋巴細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫。其中T淋巴細(xì)胞又可分為CD4+、CD8+和NK1.1+ T淋巴細(xì)胞。CD4+T淋巴細(xì)胞主要由輔T淋巴細(xì)胞(Th)構(gòu)成,其功能在于協(xié)助T、B淋巴細(xì)胞、MΦ分泌細(xì)胞因子、產(chǎn)生免疫應(yīng)答。CD8+T淋巴細(xì)胞主要由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)構(gòu)成,作為效應(yīng)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用殺傷靶細(xì)胞。NK1.1+ T淋巴細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的一群細(xì)胞,現(xiàn)認(rèn)為,NK1.1+ T淋巴細(xì)胞在防止自身免疫性疾病、控制感染及抗腫瘤免疫等方面均可發(fā)揮作用。各種T淋巴細(xì)胞之間相互影響、相互調(diào)節(jié),保持CD4+/CD8+比值相對穩(wěn)定,維持機(jī)體正常的免疫功能。淋巴細(xì)胞亞群的比例上升或下降,反映機(jī)體免疫功能發(fā)生相應(yīng)變化。CD4+/CD8+比值發(fā)生變化說明機(jī)體的免疫狀態(tài)失衡。
BCG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷模型類似于人病毒性肝炎的急性或亞急性損傷過程,是研究病毒性肝炎較理想的模型[2,3,6]。該模型是巨噬細(xì)胞(MΦ)介導(dǎo)的免疫性肝損傷, 激活的MΦ能釋放INF-γ,IL-1α,IL-6以及IL-8等多種細(xì)胞因子,刺激T淋巴細(xì)胞增殖、分化,并增強(qiáng)其功能?;罨腡淋巴細(xì)胞和INF-α等細(xì)胞因子一起作用于肝細(xì)胞,發(fā)揮免疫功能產(chǎn)生損傷。 我們在前期研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn),大蒜多糖C對免疫性肝損傷小鼠有保護(hù)性作用,在較大劑量(800 mg/kg)時更為明顯[3],因而本部分實驗也采用此劑量,進(jìn)一步觀察外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化。 實驗結(jié)果顯示,BCG+LPS模型組小鼠CD8+ T淋巴細(xì)胞比例明顯上升,這種變化導(dǎo)致了T淋巴細(xì)胞比例上升和B淋巴細(xì)胞比例相對性下降,CD4+/CD8+比值更是明顯下降;表明該模型中小鼠免疫功能的平衡狀態(tài)被打破,CTL大量增生,產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用,殺傷大量正常肝細(xì)胞。在造模同時,連續(xù)給予大蒜多糖C 800 mg/kg灌胃12 d治療后,小鼠各淋巴細(xì)胞亞群比例均下降,但CD4+/CD8+比值恢復(fù)正常;表明大蒜多糖C全面抑制BCG+LPS肝損傷小鼠機(jī)體免疫功能的過度激活,包括體液免疫和細(xì)胞免疫,阻止各種淋巴細(xì)胞增生,使其保持在較低水平,而且建立了新的免疫平衡。這種低水平的免疫平衡有兩個好處: 一方面機(jī)體免疫功能受到抑制,減輕了免疫應(yīng)答對正常肝細(xì)胞的損害,阻斷肝損傷的進(jìn)一步發(fā)展,發(fā)揮保護(hù)肝功能的作用;另一方面糾正了失衡的免疫狀態(tài),建立新的免疫平衡,有助于機(jī)體整體恢復(fù),促進(jìn)肝功能恢復(fù)。
參考文獻(xiàn)
[1] 邱英鋒,繆曉輝,王俊學(xué),等.卡介苗加脂多糖建立大鼠急性免疫性肝損傷模型的研究[J].實驗動物與科學(xué)管理,2004,21(3):15.
[2] Ding AH, Nathan CF. Trance level of bacterial lipopolysaccharide prevents interferon-γ or tumor necrosis factor-alpha from enhancing mouse peritoneal macrophage respiration burst capacity[J].Immunol,1987,139:1971
[3] 趙 驥,鄭 敏,鮑翠玉,等. 大蒜多糖C對免疫性肝損傷小鼠血清及肝組織ALT、AST的影響[J].咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2005,19(1):24.
[4] 鄭 敏,盧葵花,吳基良,等.大蒜多糖體外抗乙型肝炎病毒作用研究[J]. 中藥藥理與臨床,2005,21(3):29.
[5] 鄭 敏,潘世斌,姜友定,等.大蒜多糖對肝損傷小鼠血清和肝組織ALT,AST的影響及其毒性實驗[J].咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2003,17(2):85.
醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)包括基礎(chǔ)和臨床免疫兩部分,其中基礎(chǔ)免疫教學(xué)主要包括免疫細(xì)胞、免疫器官、免疫分子及免疫應(yīng)答等內(nèi)容,在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)占據(jù)主干,具有較強(qiáng)的理論及嚴(yán)謹(jǐn)?shù)倪壿嬓?。但是由于免疫學(xué)知識抽象、深奧,內(nèi)容繁雜,學(xué)生理解起來較困?y、枯燥,學(xué)習(xí)興趣不能提起,致使免疫學(xué)的學(xué)習(xí)提升難度。因此,如何能提高其教學(xué)質(zhì)量,使內(nèi)容由深入淺、由繁化簡,是每位免疫老師需要思考的問題。針對延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院對臨床學(xué)專業(yè)的改革以及臨床學(xué)學(xué)生的特點,我們免疫學(xué)教研室在原有基礎(chǔ)上查閱了相關(guān)文獻(xiàn)、視頻資料,還包括一些在臨床方面的應(yīng)用,同時將科研匯入到教學(xué)中,激發(fā)了學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣,課堂氣氛也得到提升,取得了良好的效果。
一、激發(fā)學(xué)生對免疫學(xué)學(xué)習(xí)的興趣
愛因斯坦曾經(jīng)說過:“興趣是最好的老師”。也就是說一旦人們對一些事物激起了濃厚的興趣,自然會主動去學(xué)習(xí)、去摸索、去實踐,同時在此過程中產(chǎn)生美好的情緒、體驗,因此,從第一堂課緒論開始就應(yīng)引入故事,醫(yī)學(xué)免疫學(xué)從發(fā)現(xiàn)到證實的每個知識點,都有一段感人的科學(xué)故事,比如將預(yù)防天花的“痘苗”的發(fā)現(xiàn)作為鋪墊,將抽象的“免疫”具體化為學(xué)生們碰觸過的事件,使學(xué)生們對“免疫的感念”有個初步的認(rèn)知,在故事的背景下再闡明免疫的概念及免疫的功能等抽象的知識就順理成章了。免疫學(xué)其他的概念同樣有相關(guān)的故事,比如德國科學(xué)家貝林用白喉抗血清拯救白喉患兒故事,從而得出了抗體這章知識的學(xué)習(xí)。因而,在同學(xué)們學(xué)習(xí)的每一新章里,老師們都必須用心設(shè)計,耐心引導(dǎo),同學(xué)們對相關(guān)章節(jié)的知識產(chǎn)生濃密的學(xué)習(xí)樂趣,以帶動其學(xué)習(xí)主動性和積極性。[2]
二、提高學(xué)生對免疫學(xué)教學(xué)的重視
吸引學(xué)生對免疫學(xué)學(xué)習(xí)的重視,才能使學(xué)生有學(xué)好免疫學(xué)的決心,所以,將以下幾點教學(xué)貫穿在整個教學(xué)過程中。
1、納入諾貝爾獎的教學(xué)
向?qū)W生們介紹關(guān)于醫(yī)學(xué)免疫學(xué)在諾貝爾獎中所取得的主要業(yè)績,提高學(xué)生們了解免疫學(xué)的重要性及其發(fā)展趨勢。例如,早在1908年,俄國科學(xué)家伊拉?伊里奇?梅契尼科夫與德國科學(xué)家保羅?埃爾利希發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞吞噬作用,從而取得了諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎。隨后,奧地利的Karl Landsteiner 在1900 年發(fā)現(xiàn)了 A、B、O血型以及 1913 年法國的Charles Robert Richet對超敏反應(yīng)的研究,分別獲取了的生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎。到2000 年以后,仍然有關(guān)于醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的研究而獲獎。其中艾滋病病毒的發(fā)現(xiàn)者Luc Montagnier 和 Francoise Barre Sinoussi兩位科學(xué)家因此在2008年獲得諾貝爾獎。此類科學(xué)家們的故事講解可使原本枯燥無味的講課格外生動,引起學(xué)生對免疫學(xué)的重視性。
2、結(jié)合實驗課教學(xué)
在講授理論教學(xué)的同時,實驗課的教學(xué)可驗證其基礎(chǔ)知識,能協(xié)助學(xué)生對理論知識的深入理解,同時也鍛煉了學(xué)生的實驗操作能力,提升他們獨立思考、解決問題的能力。[3-4]常見的免疫學(xué)試驗分如凝集反應(yīng)、ELISA、吞噬實驗及單核細(xì)胞的分離及過敏原檢測等。即可以提高學(xué)生科研操作能力,同時也進(jìn)一步加深他們對理論知識的理解,通過理論教學(xué)結(jié)合實驗操作及其發(fā)生原理的講解,引起學(xué)生對醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的重視。
3、結(jié)合臨床病例進(jìn)行教學(xué)
關(guān)鍵詞:免疫學(xué);食品專業(yè);積極性;互動
中圖分類號:G622
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:16749944(2017)09023402
1 引言
作為生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)性、支柱性學(xué)科,免疫學(xué)非常重要。免疫學(xué)與基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、微生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、營養(yǎng)學(xué)等學(xué)科均有一定的交叉。目前在蘇州大學(xué),免疫學(xué)也是食品系學(xué)生的必修課程之一[1,2]。然而,由于專業(yè)背景的差異,食品系學(xué)生在學(xué)習(xí)免疫學(xué)的過程中有著不同于醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生的規(guī)律和特點。而且近10多年來,免疫學(xué)的發(fā)展更是日新月異,基礎(chǔ)理論不斷修正和更新,新的免疫學(xué)技術(shù)不斷涌現(xiàn)。這就要求免疫學(xué)專業(yè)教師必須采取合適的策略和方法,才能夠取得理想的教學(xué)效果。筆者同時承擔(dān)著醫(yī)學(xué)專業(yè)和食品專業(yè)學(xué)生的免疫學(xué)n程,在教學(xué)過程中總結(jié)了一些經(jīng)驗和教訓(xùn),在此與大家共同分享授課過程中的一些心得與體會。
2 教學(xué)方法分析
2.1 以日常生活中的實例調(diào)動學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性
免疫學(xué)理論知識較為抽象、內(nèi)容繁雜、概念和英文縮寫較多,即使對于醫(yī)學(xué)背景的學(xué)生來說,學(xué)習(xí)上也存在著一定的難度,部分同學(xué)對免疫學(xué)學(xué)習(xí)興趣低下,學(xué)習(xí)效果不理想[3~5]。因此,調(diào)動食品專業(yè)學(xué)生學(xué)習(xí)免疫學(xué)的興趣,是提高授課效果的關(guān)鍵因素之一。筆者認(rèn)為,可以結(jié)合日常生活中的實例,講解背后的免疫學(xué)原理,這樣有助于提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。比如,筆者在講授“超敏反應(yīng)”時,以日常生活中的花生和雞蛋過敏為例,先給學(xué)生介紹基本癥狀,再結(jié)合生理學(xué)和免疫學(xué)知識詳細(xì)講解引起超敏反應(yīng)的機(jī)制。然后又拓展到花粉過敏、螨蟲過敏等其它常見的過敏性疾病。這樣,一方面貼近實際生活,另一方面也與食品系學(xué)生的專業(yè)背景相符合,提高了他們學(xué)習(xí)免疫學(xué)的興趣。又如,在講授“免疫缺陷病”章節(jié)關(guān)于“人免疫缺陷病毒導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征”時,通過講解骨髓移植治療HIV感染的病例,一方面復(fù)習(xí)了HIV病毒入侵T細(xì)胞的機(jī)制;另一方面鼓勵學(xué)生多學(xué)習(xí)免疫學(xué)知識以及其它學(xué)科的知識,并靈活運用到工作和生活中。在講授免疫耐受時,通過實驗分組的討論,讓學(xué)生了解科學(xué)實驗的構(gòu)思及邏輯。通過講述一些偉大免疫學(xué)家取得的成就及其研究過程,激發(fā)學(xué)生對免疫學(xué)的的主動學(xué)習(xí)熱情和興趣。
2.2 運用多媒體課件,使抽象的理論豐滿生動
在科學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展,知識成倍增長的信息時代,各種新式的教學(xué)手段和方法層出不窮。怎樣使免疫學(xué)那些“看不見、摸不著”的概念和抽象的理論具象化、生動化,是對課件的基本要求之一,也是教學(xué)方法研究的重點之一。筆者認(rèn)為,在課件中應(yīng)該盡量減少文字,多以圖片及動畫的形式,詳細(xì)、系統(tǒng)、精確地展示免疫學(xué)的基本理論。比如通過圖片演示免疫細(xì)胞結(jié)構(gòu)時,可以通過不同形狀和顏色去區(qū)分不同的細(xì)胞器;講解T細(xì)胞活化過程時,通過動畫、視頻的方式一步步演示T細(xì)胞活化的步驟,并且在關(guān)鍵步驟要有顏色深淺的區(qū)分。在講解淋巴細(xì)胞的黏附與遷移時,則首先要通過圖片講解黏附分子的結(jié)構(gòu)和相應(yīng)的配體,然后通過視頻一步步講解淋巴細(xì)胞在趨化因子的驅(qū)動下,引起黏附分子構(gòu)象的變化,從而將不同的淋巴細(xì)胞募集到特定的免疫器官。多媒體手段的引入,使抽象的理論變得形象具體,有利于學(xué)生對這些理論的理解及記憶,激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情。
2.3 重點傳授免疫學(xué)的學(xué)習(xí)方法,引導(dǎo)學(xué)生主動學(xué)習(xí)
在免疫學(xué)知識快速更新,各種信息呈現(xiàn)爆發(fā)式增長的信息時代,免疫學(xué)理論不斷地擴(kuò)充。因此,作為教師也要不斷整合新知識、更新舊理論,提高自身的知識水平。應(yīng)深刻認(rèn)識到,只依靠老師的講解和傳授是不可能把免疫學(xué)的全部知識教授給學(xué)生的。因此,讓學(xué)生掌握學(xué)習(xí)方法,引導(dǎo)學(xué)生主動學(xué)習(xí)已經(jīng)成為各個大學(xué)階段學(xué)習(xí)的基本要求之一。教師不僅僅要在課堂上傳授書本上的理論知識,而且還要傳授給他們學(xué)習(xí)方法,培養(yǎng)他們自我學(xué)習(xí)的能力。蘇州大學(xué)的老師都非常重視提高學(xué)生的自學(xué)能力。在筆者的授課過程中,主要從以下幾個方面來培養(yǎng)學(xué)生的自我學(xué)習(xí)、自我管理能力。首先,從今后的學(xué)習(xí)和工作角度,強(qiáng)調(diào)免疫學(xué)理論知識的重要性,讓學(xué)生了解到,幾乎所有的疾病都與免疫系統(tǒng)有一定的關(guān)系。其次,摘取頂級期刊的最新的研究結(jié)果,向?qū)W生展示免疫學(xué)的重要性。再次,向?qū)W生推薦一些免疫學(xué)的經(jīng)典著作,包括中文以及英文的經(jīng)典教材。最后,給學(xué)生推薦一些免疫學(xué)論壇的網(wǎng)址和鏈接,讓學(xué)生自己通過互聯(lián)網(wǎng)去查閱免疫學(xué)資料。通過學(xué)習(xí)方法的傳授,增強(qiáng)了學(xué)生的學(xué)習(xí)能力,達(dá)到了“授之以漁”的教學(xué)目的。
2.4 及時復(fù)習(xí)并增強(qiáng)課后互動
在每節(jié)課開始前,都要對上次課的重點內(nèi)容進(jìn)行復(fù)習(xí),這樣可以不斷加深對免疫學(xué)知識的理解和記憶。如在講解T細(xì)胞受體時,首先回顧B細(xì)胞受體的結(jié)構(gòu),引出T細(xì)胞受體的內(nèi)容;在講解了T細(xì)胞受體結(jié)構(gòu)后,將其與B細(xì)胞受體進(jìn)行比較,分析二者在結(jié)構(gòu)上的相似性和差異,可以增強(qiáng)學(xué)生對兩種受體結(jié)構(gòu)的理解和記憶。在“淋巴細(xì)胞的分化發(fā)育”章節(jié),著重講解T細(xì)胞和B細(xì)胞在中樞發(fā)育的相似之處和不同之處,通過視頻動態(tài)呈現(xiàn)B細(xì)胞和T細(xì)胞發(fā)育的過程。在講授過程中,及時提出問題,如“外周淋巴結(jié)中是αβT細(xì)胞多還是γλT細(xì)胞多?為什么?”。通過這種互動,將原本比較枯燥的TCR胚系基因圖以及難以理解的T細(xì)胞發(fā)育過程變得生動、形象,大大提高學(xué)生學(xué)習(xí)的效果和興趣。在講解理論知識時,幽默、風(fēng)趣、形象的比喻,能夠快速地活躍課堂氣氛、吸引學(xué)生的注意力。生動的比喻帶給學(xué)生對免疫學(xué)抽象概念的形象理解,比如在講解“細(xì)胞因子的分泌方式”時,筆者將“自分泌作用方式”比喻成自己掙錢自己花;“旁分泌作用方式”比喻成自己掙錢朋友花;“內(nèi)分泌作用方式”比喻成自己掙錢多了,就去做慈善,讓邊遠(yuǎn)地區(qū)的人民一起花。這使得免疫學(xué)課程的節(jié)奏變得生動、活潑、輕快,使學(xué)生易于接受免疫學(xué)的理論知識。課后,通過手機(jī)、電子郵件及微信、QQ等軟件,進(jìn)行實時互動與交流。在互動的同時,鼓勵學(xué)生自主學(xué)習(xí)免疫學(xué)理論知識,并用免疫學(xué)理論知識去解釋日常生活中及臨床上的現(xiàn)象,做到學(xué)以致用。這些課中、課后的交流與互動手段,充分調(diào)動了學(xué)生的主觀能動性和學(xué)習(xí)興趣,提高了免疫學(xué)的教學(xué)與學(xué)習(xí)效果。
3 結(jié)語
對食品專業(yè)的學(xué)生而言,免疫學(xué)是一門相對深奧、抽象、邏輯性強(qiáng)的課程。這就要求我們在教學(xué)中貫徹“教師主導(dǎo),學(xué)生為主體”的教育理念。運用各種新穎的教學(xué)方法與手段,在預(yù)習(xí)、復(fù)習(xí)及課堂教學(xué)的各個環(huán)節(jié),培養(yǎng)和激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。在充分調(diào)動學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣的同時,引導(dǎo)學(xué)生主動學(xué)習(xí),形成良好的互動氛圍,營造良好的課堂氣氛,提高教學(xué)效果。近10年來,免疫學(xué)新理論層出不窮,許多免疫學(xué)現(xiàn)象有了新的、更合理的解釋,甚至有的理論被重新改寫。這些對于教授免疫學(xué)的教師來說是一種挑戰(zhàn),要求我們要與時俱進(jìn),時刻主動學(xué)習(xí)新理論、更新知識。在將新理論傳授給學(xué)生的同時,也要讓學(xué)生掌握免疫學(xué)的學(xué)習(xí)方法,讓他們自己完成知識的整合、更新,為其進(jìn)一步深入學(xué)習(xí)、研究打下一個堅實的基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn):
[1]鄭源強(qiáng),包玉龍,丁 楓,等.研究生醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗教學(xué)改革與探索[J].中國免疫學(xué)雜志,2015(31):548~550.
[2]杜 冰,任 華,祁 靈,等.免疫學(xué)技術(shù)實驗教學(xué)改革初探[J].中國免疫學(xué)雜志,2014(30):404~405.
[3]林巧愛,薛向陽.提高醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)效果探討[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教育,2011(13):407~409.
關(guān)鍵詞 免疫學(xué);教學(xué)方法;教學(xué)改革
中圖分類號:G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B
文章編號:1671-489X(2016)04-0129-02
Teaching Reform Exploration and Practice of Immunology Course//YUAN Zuoqing, ZHANG Jianyong, PANG Qiuxiang, DENG Hongkuan
Abstract In this paper, we discuss the reform exploration and practice during our teaching Immunology course, including the first class, theoretical contacting reality, flexible application of various teaching methods, the combination of teaching and science research, as well as modern multimedia. All of above make our classroom teaching significantly improved.
Key words immunology; teaching methods; teaching reform
1 前言
免疫學(xué)是生命科學(xué)的重要基礎(chǔ)學(xué)科,也是生命科學(xué)的前沿學(xué)科之一,推動著生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展。因此,免疫學(xué)不僅是醫(yī)學(xué)專業(yè)的重要基礎(chǔ)課程,也是一些高校生物科學(xué)專業(yè)的必修課。免疫學(xué)發(fā)展迅速,知識點多、概念多,前后內(nèi)容不僅銜接緊密,而且比較抽象復(fù)雜,學(xué)生普遍感到枯燥難學(xué)、不容易理解和記憶,導(dǎo)致死記硬背,學(xué)習(xí)積極性和主動性不高,教學(xué)效果不理想[1]。本文結(jié)合筆者近幾年的教學(xué)實踐經(jīng)驗,針對免疫學(xué)課程的特點,談?wù)勗诿庖邔W(xué)教學(xué)過程中進(jìn)行教學(xué)改革和增強(qiáng)教學(xué)效果的探索與嘗試。
2 注重“首因”,以精彩緒論奠定良好開端
根據(jù)“首因效應(yīng)”原理,個體在社會認(rèn)知過程中,通過“第一印象”最先輸入的信息對人們以后的認(rèn)知產(chǎn)生的影響作用最強(qiáng),持續(xù)的時間也長,比以后得到的信息對于事物整個印象產(chǎn)生的作用更強(qiáng)[2]。因此,第一堂緒論課非常重要,力爭在內(nèi)容和形式上吸引學(xué)生的注意力,使學(xué)生喜歡上免疫學(xué)。
緒論除了介紹免疫學(xué)的基本概念、發(fā)展史外,還通過串聯(lián)的形式介紹各章節(jié)的主要內(nèi)容,突出其前后銜接和內(nèi)在聯(lián)系的緊密性。對免疫學(xué)發(fā)展史的講解,應(yīng)該兼具科學(xué)性與故事性,可以通過列舉一些著名的傳染性疾病,講解人們?nèi)绾螒?yīng)用免疫學(xué)方法來預(yù)防這些傳染病,使學(xué)生明白很多疾病的發(fā)病機(jī)制都可以用免疫學(xué)的理論知識來進(jìn)行解釋,很多臨床病例的診斷及治療也涉及應(yīng)用免疫學(xué)相關(guān)的技術(shù)和方法,使學(xué)生感到原來免疫學(xué)就在身邊,與生活息息相關(guān),從而激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)免疫學(xué)的學(xué)習(xí)興趣。
免疫學(xué)以及免疫學(xué)密切相關(guān)的科學(xué)成果在歷年諾貝爾獎的頒發(fā)中所占的比例是任何生物醫(yī)學(xué)學(xué)科所屬的單一學(xué)科所不能比擬的。通過向?qū)W生介紹一些免疫學(xué)方面的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎獲獎?wù)撸怀雒庖邔W(xué)在生命科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)中的重要地位,從而進(jìn)一步提高學(xué)生學(xué)習(xí)免疫學(xué)的熱情和興趣。
3 案例導(dǎo)入,以情趣促認(rèn)知
免疫學(xué)理論知識和分析技術(shù)與臨床病例等實際應(yīng)用緊密聯(lián)系[3]。在理論教學(xué)過程中,根據(jù)各章節(jié)內(nèi)容適當(dāng)引入相關(guān)的臨床病例和實驗應(yīng)用分析,將抽象的理論知識具體化,加深學(xué)生對所學(xué)理論知識的理解,避免照本宣科的講授和枯燥的理論說教,充分調(diào)動學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,使他們主動接受知識。如講到免疫凝集時,告訴學(xué)生免疫凝集就是抗體與顆??乖Y(jié)合形成的肉眼可見的凝集反應(yīng)。學(xué)生可能還是不能理解凝集反應(yīng)是什么,這時引入具體的例子分析,舉例常見的免疫凝集反應(yīng),如血型鑒定試驗。告訴學(xué)生血細(xì)胞凝集反應(yīng)抗體識別的抗原是紅細(xì)胞表明的天然抗原,紅細(xì)胞在這里扮演的就是顆粒性的抗原,因此能與抗體發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng),從而進(jìn)行血型診斷。
這時還可以引入凝集抑制實驗,凝集抑制實驗可以用來進(jìn)行妊娠檢測和是否吸食檢測。這樣理論聯(lián)系實踐的講授能使抽象的知識具體化,從而激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,進(jìn)一步加深學(xué)生對免疫凝集概念的認(rèn)識,對以抗原抗體為理論基礎(chǔ)的免疫分析技術(shù)在臨床實驗分析中的應(yīng)用有更深入的了解。
4 方法驅(qū)動,提升課堂參與度
在教學(xué)過程中根據(jù)教學(xué)內(nèi)容采取多種教學(xué)方法(如提問式教學(xué)、比喻教學(xué)、啟發(fā)式教學(xué)和雙語教學(xué))來充分調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性和主動性,讓學(xué)生真正參與到教學(xué)中來,由被動接受知識向主動接受知識轉(zhuǎn)變。
提問式教學(xué) 課前可以提問學(xué)生上一堂課所學(xué)的主要內(nèi)容,促使學(xué)生課后復(fù)習(xí)上一堂課的教學(xué)內(nèi)容。在教學(xué)過程中,可以根據(jù)教學(xué)內(nèi)容隨時提問,使學(xué)生在課堂上主動思考問題,增加師生之間的互動,避免長時間的講授。學(xué)生長時間聽講容易走神,注意力不集中。如在講授影響抗原免疫原性的因素時,可以提問:“為什么抗原的分子量越大,結(jié)構(gòu)越復(fù)雜,抗原的免疫原性就越大?”講授完補體活化的三條途徑,可以提問:“補體活化三條途徑的相似性和差異性如何?”
比喻教學(xué) 比喻教學(xué)法是指在課堂教學(xué)過程中,用大家熟知的物品、知識或經(jīng)驗來類比,進(jìn)行教學(xué)的方法[5]。如在講授免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能時,可以將人體的免疫系統(tǒng)與一個國家的國防系統(tǒng)來進(jìn)行類比,通過比喻教學(xué)法可以使抽象的理論知識變得通俗易懂,加深學(xué)生對抽象概念的理解。
啟發(fā)式教學(xué) 在教學(xué)過程中可以進(jìn)行一些啟發(fā)式的提問,使學(xué)生發(fā)散思維,積極主動思考,靈活運用已有的理論知識來回答問題,調(diào)動學(xué)生的求知欲。如在講授抗體的類別時,可以啟發(fā)學(xué)生思考:“IgM血清異性IgM水平增高,提示有近期感染;臍帶血或新生兒血清中IgM水平升高,表明胎兒有宮內(nèi)感染,診斷的依據(jù)是什么?”
雙語教學(xué) 免疫學(xué)教學(xué)內(nèi)容中英文縮寫詞比較多,在教學(xué)過程中可以根據(jù)教學(xué)內(nèi)容適當(dāng)穿行雙語教學(xué),一些專業(yè)英語詞匯和句子可以用英語來進(jìn)行講授,加深學(xué)生對英語縮寫詞的理解記憶,提高學(xué)習(xí)免疫學(xué)的興趣,為以后專業(yè)英語的學(xué)習(xí)和閱讀英語專業(yè)期刊文獻(xiàn)打下基礎(chǔ)。
5 “教”“研”共進(jìn),踐行“研究性教學(xué)”
在教學(xué)過程中,根據(jù)教學(xué)內(nèi)容可以適當(dāng)?shù)匾胍恍┟庖邔W(xué)的國際前沿動態(tài)介紹,也可以將教師的科研項目及成果圖片引入課堂教學(xué)中來,不僅可以增加學(xué)生學(xué)習(xí)免疫學(xué)的興趣,還能吸引學(xué)生申報學(xué)校的創(chuàng)新研究項目,課后積極主動地參與到教師的科學(xué)研究中來。如講授抗原抗體反應(yīng)時,可以結(jié)合教師承擔(dān)的科研項目“全氟辛烷磺酸對渦蟲神經(jīng)再生毒性研究”進(jìn)行講解,全氟辛烷磺酸作為一種環(huán)境污染物,對渦蟲的神經(jīng)再生有影響,就可以使用酶標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的抗神經(jīng)突觸的抗體來檢測渦蟲神經(jīng)再生的情況。這樣教學(xué)與科研相結(jié)合的講解,不僅可以使學(xué)生更好地理解免疫熒光分析技術(shù),還使學(xué)生知道如何將所學(xué)的免疫學(xué)知識運用到科學(xué)研究中去,培養(yǎng)學(xué)生的科研意識,為他們以后進(jìn)行科學(xué)研究打下基礎(chǔ)。
6 教學(xué)手段優(yōu)化,多媒體呈現(xiàn)與板書設(shè)計相輔相成
免疫學(xué)內(nèi)容比較抽象復(fù)雜,在教學(xué)過程中采取多媒體課件教學(xué)與傳統(tǒng)的板書教學(xué)相結(jié)合進(jìn)行教學(xué)。圖文并茂的多媒體課件使抽象的免疫學(xué)作用通路和反應(yīng)機(jī)制具體化、形象化、簡單化,有利于學(xué)生理解和掌握所學(xué)內(nèi)容[4]。如在講授抗體介導(dǎo)的調(diào)理作用時,使用多媒體圖片教學(xué)形象直觀,學(xué)生就能比較容易理解,牢固掌握所學(xué)知識。免疫學(xué)知識點多,內(nèi)容復(fù)雜,如果完全依靠多媒體教學(xué),往往導(dǎo)致教學(xué)速度過快,學(xué)生難以短時間內(nèi)接受大量教學(xué)信息。尤其是一些比較難的知識點,學(xué)生課堂上可能就沒完全掌握,從而影響教學(xué)效果。在教學(xué)過程中將多媒體教學(xué)和板書教學(xué)適時結(jié)合,深入淺出地進(jìn)行教學(xué),不僅能放慢教學(xué)速度,而且有利于借助板書的即時性、互動性特征,強(qiáng)化學(xué)生對關(guān)鍵知識點的理解和掌握。
7 結(jié)束語
以上是筆者近年來在免疫學(xué)教學(xué)實踐當(dāng)中的一些探索與實踐,今后將在教學(xué)實踐中繼續(xù)完善教學(xué)手段和教學(xué)方法,引導(dǎo)學(xué)生積極參與到課堂教學(xué)中來,使越來越多的學(xué)生喜歡免疫學(xué),不斷增強(qiáng)免疫學(xué)的教學(xué)效果。
參考文獻(xiàn)
[1]張群芝.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)教學(xué)改革與探索[J].繼續(xù)教育,
2014,8(10):61-62.
[2]操龍升.淺析心理學(xué)“首因效應(yīng)”和“近因效應(yīng)”對英語課堂教學(xué)的影響[J].基礎(chǔ)教育課程,2014(24):8-9.