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1藥名相似中藥的對比記憶
在中藥中有些藥名相似而功效又不完全相同的藥物可用對比記憶。如羌活與獨活都能祛風(fēng)散寒除濕止痛,常相互配伍應(yīng)用,主治風(fēng)濕痹證。其中羌活善于祛在表在上之風(fēng)濕,治上肢風(fēng)濕痹痛;獨活善于祛在里在下之風(fēng)濕,治下肢風(fēng)濕痹痛。再如白術(shù)與蒼術(shù)均有健脾燥濕之功,白術(shù)則以健脾為主,多用于脾虛之證;蒼術(shù)以燥濕為主,多用于濕盛之證。又如白芍與赤芍,白芍具有養(yǎng)血斂陰,緩急止痛之功,而赤芍具有清熱涼血,活血祛瘀之效。諸如此類的還有黃連與胡黃連、柴胡與銀柴胡、石決明與草決明、川貝母與浙貝母等。
2功效相似中藥的對比記憶
有些中藥的功效和臨床主治存在某些共性,又各有特點,也可用對比記憶法。如辛溫解表的麻黃與桂枝都能發(fā)散風(fēng)寒治風(fēng)寒表證,麻黃多用于外感風(fēng)寒表實無汗,而桂枝還可用于外感風(fēng)寒表虛有汗。再如陳曲、麥芽、山楂“焦三仙”,都有消食健胃之功,常相互配伍應(yīng)用,而麥芽善消面食積兼有回乳作用;山楂善消肉食積兼有活血祛瘀;陳曲善消肉面混合食積。又如黃芩、黃連、黃柏“三黃”,相同點是性味苦寒,作用相似,均有清熱瀉火燥濕解毒之功,不同點是黃芩偏清上焦熱,善瀉肺火,兼有安胎作用;黃連偏清中焦熱,善瀉心火,兼除心煩;黃柏偏清下焦熱,善瀉腎火,兼退虛熱。其他諸如龍骨與牡蠣、龜板與鱉甲、昆布與海藻、三棱與莪術(shù)、乳香與沒藥等。
3藥材來源相同,入藥部分不同的中藥對比記憶
有些中藥藥材來源于同一植物,由于入藥部分不同其功效也不完相同,有的甚至完全相反。如以桑樹為例,其葉名桑葉,具有疏散風(fēng)熱清肝目之功,其枝名桑枝,具有祛風(fēng)通絡(luò)之效,其根皮名桑白皮,有瀉肺平喘利水消腫功用,其果實名桑椹子,有滋陰補血生津潤腸作用。再如當(dāng)歸能補血調(diào)經(jīng),是治婦科病證的常用藥,而當(dāng)歸身以補血為主多用于血虛證,當(dāng)歸尾以破血為主多用于血瘀證,全當(dāng)歸既能補血又能活血可用于血虛兼血瘀而致的婦科病證。又如麻黃與麻黃根同出一種植物,其莖枝是麻黃,有發(fā)汗解表作用,治外感風(fēng)寒表實無汗,其根名麻黃根,具有止汗功效,主治表虛自汗出。兩者功效相反,臨床應(yīng)用不能相互替代。
1.1引入中藥諺語和典故[4]中藥的認(rèn)識來自生活實踐，中藥知識傳播由最初的“師學(xué)相承”、“口耳相傳”發(fā)展到文字記載，其間流傳了許多中藥諺語、中藥典故、民間傳說等。如果加以運用，不但能使學(xué)生輕松地學(xué)習(xí)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)知識，還可使他們從中體味中國傳統(tǒng)文化的無窮魅力。長時間聽課或內(nèi)容確實枯燥容易感到疲勞，簡單有趣的故事可以極大地吸引學(xué)生的注意力，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，如講解中藥紫蘇時，可以穿插華佗的故事。紫蘇是名醫(yī)華佗發(fā)現(xiàn)一只水獺吃螃蟹中毒后打滾，就近找到一株紫色的草，服后癥狀消失，因該草服后能讓人舒服，故名“紫舒”，久而成“紫蘇”，通過故事吸引學(xué)生，還使學(xué)生當(dāng)即記住紫蘇“解魚蟹毒”的功效。又如諺語“三月茵陳四月蒿五月六月當(dāng)柴燒”，形象地介紹了茵陳的采集時間與藥用價值問題。此外，有些內(nèi)容作為中藥傳統(tǒng)文化知識，在教學(xué)中恰當(dāng)引用，可激發(fā)同學(xué)們的求知欲和民族自豪感。當(dāng)然，對于中藥諺語、典故的引入適可而止，不能濫用。
1.2成立中藥興趣社團如我校學(xué)生成立的百草社，學(xué)生自發(fā)組織中草藥圖片攝影展、藥用植物花卉栽培等，取得了較好的效果，不但加深了對藥物的認(rèn)識，還陶冶了情操、增進(jìn)了友誼。
2歸納比較教學(xué)法
中藥學(xué)教學(xué)中注重以主要功效為主線，在共性的基礎(chǔ)上把握個性，或以共有的功效主治、相同的來源、相同的病證(癥狀)等，通過把零亂的中藥學(xué)知識歸納比較，使同學(xué)們在循序漸進(jìn)的學(xué)習(xí)過程中逐漸在頭腦中形成了一個較為系統(tǒng)的中藥學(xué)知識網(wǎng)絡(luò)，就可以把厚厚的一本《中藥學(xué)》課本變薄、學(xué)透。
2.1以功效為主線，比較相似功用辨析機理領(lǐng)悟中藥藥性如生姜、藿香、半夏均有止嘔作用，可治療嘔吐。但是生姜多溫中止嘔，藿香祛濕止嘔，半夏則降逆止嘔。
2.2比較藥物不同炮制品的作用，掌握炮制前后性能功用的變化如生黃連善清心火，清熱解毒；酒黃連善清頭目之火；姜黃連善清胃、和胃、止嘔。再如生地黃清熱涼血，熟地黃滋陰補血；生首烏解毒截瘧通便，制首烏補肝腎，益精血，烏須發(fā)。
2.3根據(jù)歸經(jīng)的不同歸類藥物把握個性特點如清熱燥濕藥中，黃芩善清肺熱，黃連善清心胃火，黃柏善泄虛火，龍膽草則瀉肝膽實火。
2.4歸納同源藥物的不同入藥部位比較作用區(qū)別如板藍(lán)根與大青葉，肉桂與桂枝，川楝子與苦楝皮，大腹皮與檳榔，麻黃莖與麻黃根，附子與烏頭，桑葉、桑枝、桑皮與桑椹等等[5]。中藥學(xué)內(nèi)容繁雜，知識容易混淆和遺忘，引導(dǎo)學(xué)生以列表法把藥物的各種屬性加以類比，同中求異，異中求同，便于知識的系統(tǒng)化、條理化。如將各味毒性藥、貴重藥的劑量列表，強化安全用藥意識；列表比較藥物功效、歸類相似藥名的藥物，易學(xué)易記。顯然，列表法比較藥物，形式直觀，條理清晰，其優(yōu)越性一目了然。
3應(yīng)用PBL與LBL相結(jié)合的教學(xué)模式
中藥學(xué)課程不僅強調(diào)知識的系統(tǒng)全面性，而且也強調(diào)知識的靈活應(yīng)用性。高職高專院校學(xué)生的求知欲低，解決問題及自主學(xué)習(xí)能力較差，這些條件決定了在教學(xué)中應(yīng)以LBL為主，PBL為輔[6]。
3.1總論教學(xué)以LBL教學(xué)為主，融入PBL思想中藥學(xué)總論部分主要介紹中藥的起源和發(fā)展、中藥的產(chǎn)地與采集、中藥的炮制、中藥的性能、中藥的配伍等內(nèi)容，這部分主要采用以問題為引導(dǎo)的講授式教學(xué)。
3.2各論部分運用PBL一般中藥學(xué)教材內(nèi)容分為重點講授藥和非重點講授藥。對于“重點講授藥”，性能、功效、臨床應(yīng)用、用量、使用注意等均詳細(xì)講解。下面以重點講授藥為例進(jìn)行PBL教學(xué)：
3.2.1創(chuàng)設(shè)情境教師以實物或ppt給學(xué)生呈現(xiàn)圖片、視頻以及提綱挈領(lǐng)的文字等學(xué)習(xí)資源，簡要介紹有關(guān)背景，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的熱情，從而引出問題情景。
3.2.2設(shè)計問題用問題和案例激發(fā)學(xué)生的好奇心和求知欲。教師可讓學(xué)生根據(jù)以前的知識提出問題，也可根據(jù)生活中的真實情境提出需要解決的問題等。
3.2.3查閱資料學(xué)生根據(jù)老師提出的問題，充分利用網(wǎng)絡(luò)和圖書館的資源收集與該藥材相關(guān)的信息。
3.2.4小組討論各組闡述各自的觀點和看法，展開交流辯論，暢所欲言；教師從中啟發(fā)和引導(dǎo)，控制討論的節(jié)奏，協(xié)調(diào)各組的關(guān)系。
3.2.5教師總結(jié)教師對各組的觀點從知識和能力等多方面進(jìn)行點評，詳細(xì)分析有普遍意義或爭議較大的問題，最后總結(jié)歸納章節(jié)重點、難點知識。
4結(jié)語
摘要：
桑樹含有多種活性成分，如黃酮類物質(zhì)、多糖、生物堿等活性物質(zhì)，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗氧化、提高人體免疫力等作用。活性物質(zhì)提取是藥理作用研究的關(guān)鍵和后續(xù)藥品與健康食品開發(fā)的基礎(chǔ)。通過對桑葉、桑枝中總黃酮以及具有代表性的黃酮類化合物，如槲皮素、花青素、蘆丁，桑葉多糖、桑枝多糖，總生物堿以及具有代表性的生物堿類化合物1-脫氧野尻霉素（DNJ）的提取方法進(jìn)行綜述，為這幾種活性物質(zhì)的利用和開發(fā)提供依據(jù)。
關(guān)鍵詞：
桑樹；活性成分；提取利用
中國是蠶桑產(chǎn)業(yè)的發(fā)源地，也是桑樹種植面積最大的國家之一，擁有豐富的桑樹品種資源。桑樹是落葉性多年生木本植物，自古以來就被認(rèn)作是藥食兩用的珍貴材料，現(xiàn)代科學(xué)也已經(jīng)證實了桑樹資源的營養(yǎng)成分、藥理活性成分及作用機理［1］。桑葉是家蠶唯一的飼料，同時還可入藥，早在《本草綱目》［2］中就有記載：“桑葉乃手足陽明之藥，汁煎代茗，能止消渴，明目長發(fā)。”現(xiàn)代科學(xué)研究結(jié)果表明桑葉中有著多種的有效活性成分，諸如黃酮類化合物、生物堿（DNJ等）、多糖、葉蛋白等。桑枝主要指桑樹的一年生枝條，據(jù)《中國藥典》記載，桑枝作為常用的中藥材，有著祛風(fēng)濕，利關(guān)節(jié)，行水之功效，適用于風(fēng)寒濕痹、四肢拘攣、腳氣浮腫之病癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，桑枝主要含有多糖、黃酮類化合物、香豆精類化合物、生物堿等活性物質(zhì)。此外還含有揮發(fā)油、氨基酸、有機酸以及各類維生素，其具有抗真菌、消炎、降血糖、清除體內(nèi)超氧離子自由基的作用［3-7］。本文主要對桑枝桑葉活性物質(zhì)提取方法進(jìn)行綜述，以期為桑樹資源的多元化開發(fā)提供參考。
1桑葉、桑枝中黃酮類物質(zhì)
1.1桑葉、桑枝中黃酮類化合物
黃酮類物質(zhì)是桑葉發(fā)揮功效的主要活性成分之一，具有降血糖、降血脂、降血壓、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗病毒等作用［8］。目前，對其藥理作用研究最多的是降血糖作用。從桑葉、桑枝中提取黃酮類物質(zhì)用來開發(fā)降血糖、降血脂、降血壓和抗腫瘤方面的藥物和健康食品，將為糖尿病患者、心血管病患者帶來福音。桑樹中黃酮類物質(zhì)較為豐富，其主要分為黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮醇類、花色素類等四大類物質(zhì)，包括槲皮素、桑色素、花青素等4000余種化合物［9-10］。
1.2桑葉、桑枝中黃酮類化合物提取方法
1.2.1桑葉、桑枝中總黃酮的提取方法
桑葉、桑枝中總黃酮的提取方法主要有有機溶劑提取法、微波輔助提取法、超聲波提取法、酶提取法、超臨界流體萃取法、半仿生提取法等［11］。目前，關(guān)于提取桑葉桑枝中總黃酮的文獻(xiàn)很多。
1.2.1.1桑葉中總黃酮提取方法
超臨界流體萃取利用了超臨界流體在臨界壓力和臨界溫度的附近所具有的獨特性能，以此性能作為溶劑萃取物質(zhì)的一種新技術(shù)。肖奇志［12］采用超臨界CO2的方法萃取桑葉中總黃酮，獲取最佳萃取工藝為：壓力35MPa，夾帶劑乙醇流量0.01mL/min，溫度為55℃，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)90%，得總黃酮萃取率達(dá)2.28%。林英男［13］用同樣的方法提取桑葉中的總黃酮，但改變了工藝條件，在萃取壓力為30MPa，萃取溫度為40℃，萃取時間為3.0h，夾帶劑無水乙醇用量為4.0mL/g的條件下進(jìn)行驗證試驗，黃酮得率達(dá)到3.2%。兩種方法大致相同，但實驗結(jié)果卻不同，筆者認(rèn)為桑品種的不同、產(chǎn)地條件的不同，其桑葉中所含的總黃酮量也可能不一樣。超聲波提取法采用的是超聲波輔助溶劑進(jìn)行提取，聲波產(chǎn)生了高速、強烈的空化效應(yīng)和攪拌的作用，快速破壞植物的細(xì)胞，使溶劑能夠滲透到藥材細(xì)胞中，縮短提取時間，提高提取效率。蘭才［14］在總黃酮提取工藝的研究中表明與煎煮法、回流法相比，超聲波提取法提取率最高，得出桑葉總黃酮提取的最佳條件為：約0.500g樣品用40mL體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇水溶液充分浸泡后，超聲波輔助提取45min，平均提取率為3.3%。
1.2.1.2桑枝中總黃酮提取方法
何雪梅等［15］采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計獲得最佳提取桑枝中總黃酮的工藝條件為：溫度80℃，時間為3.5h，乙醇濃度60%，料液比1∶40，獲得總黃酮率為0.63%；陳建明［16］采用正交試驗的方法對桑枝總黃酮超聲提取的工藝進(jìn)行研究，獲得最佳工藝條件為：乙醇濃度為80%，料液比為1∶8，超聲反復(fù)提取3次，每次提取時間為20min，此方法獲得總黃酮的平均提取率為0.719%，提取率高于前者，可見經(jīng)過超聲處理能較好地提取桑枝中的總黃酮，其操作方便、提取時間短、產(chǎn)率高而且無需加熱。目前，關(guān)于桑枝中總黃酮的提取方法的研究報道明顯少于桑葉總黃酮的提取方法，原因可能與桑枝含大量木質(zhì)和纖維不容易粉碎處理有關(guān)。
1.3桑樹幾種主要黃酮類化合物
1.3.1槲皮素
槲皮素廣泛存在于植物的花、葉、果實中，是一種具有多種生物學(xué)活性的黃酮類化合物，已知有100多種中草藥中含有槲皮素，如桑樹的枝、葉、果實，、絞股藍(lán)、山楂、銀杏葉、雞冠花、魚腥草［17］。槲皮素具有抗氧化和清除自由基、抗纖維化、抗腫瘤等作用，此外還對心血管系統(tǒng)具有降血壓、保護心肌缺血、再灌注損傷、抑制心肌肥厚和抗病毒等作用。王海燕［18］利用超聲波輔助的方法提取桑葉中槲皮素獲得了最優(yōu)工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)為51%、液料比26∶1（mL/g）、超聲功率為200W、超聲溫度70℃，可以得到桑葉槲皮素提取量為11.13mg/g。由此可見，槲皮素在桑葉中的含量還是相當(dāng)可觀的，可以利用桑葉為原材料開發(fā)有關(guān)槲皮素方面的藥品。
1.3.2花青素
花青素，由一定數(shù)量的兒茶素、表兒茶素縮合而成，屬于酚類化合物中的類黃酮類化合物，溶于水?；ㄇ嗨厥侵参矬w內(nèi)一類次生代謝物質(zhì)，存在于植物花瓣、果實的細(xì)胞液組織及莖葉的表面細(xì)胞中［19］，具有延緩衰老等作用。江巖［20］對新疆藥桑椹花青素做了提取和測定，獲得藥桑椹花青素的最佳提取工藝：溶劑體積比為0.1%的HCl溶液和95%的乙醇為40∶60、固液比為1∶20（g/mL），提取溫度為50℃，提取時間為90min，在這種條件下花青素得率為0.0305%。此實驗獲得的花青素得率比較少，是藥桑品種的桑椹花青素特別少，還是提取桑椹中花青素的問題，有待繼續(xù)研究。
1.3.3桑色素
桑色素是一種天然的活性物質(zhì)，主要有抗癌、抗炎、免疫、抗氧化等作用。存在于桑的葉、根皮和果實中［21］，李文娟［22］用AB-8型大孔吸附樹脂對新疆藥桑進(jìn)行分離純化，獲得新疆藥桑最佳提取條件：用0.1%的HCl-C2H5OH溶液，按1∶5的配比在溫度為40℃時提取1h。經(jīng)此方法純化后的色素為紫紅色的粉末，色價提高近7倍之多。
2桑葉、桑枝多糖的提取方法
2.1桑葉多糖的提取方法
多糖是極性大分子物質(zhì)，國內(nèi)外研究證明，植物、動物及菌類中均含有天然多糖，具有降血糖、降血脂、消除自由基、抗腫瘤、抑制細(xì)菌生長及增強免疫力等功能［23］。桑葉多糖是一種較為常見的生物多糖，中國是桑葉主要產(chǎn)地，大約有83萬hm2的種植面積，年產(chǎn)桑葉1500多萬t，提取桑葉多糖的原料十分豐富。目前，對于桑葉多糖的提取主要有熱水浸提法、酸浸提法、堿浸提法、酶提取法、超聲波提取法及微波提取法等。熱水浸提法是以水作為提取劑，無污染且對多糖結(jié)構(gòu)不易造成破壞，但是需要反復(fù)提取多次，提取時間久且提取率不高。沈愛英［24］經(jīng)正交實驗得出最佳桑葉多糖提取條件：桑葉粉質(zhì)量濃度為0.040g/mL，75℃水浴中抽提2次，每次60min，用80%（終體積分?jǐn)?shù)）乙醇醇析，此方法測得多糖得率為2.508%。酸堿提取由于提取液為酸性或堿性容易破壞多糖的立體結(jié)構(gòu)，而且提取后還需綜合其pH，程序復(fù)雜，多不為采用。酶提取法即采用熱水浸提法的同時加入酶的提取方法，目前酶提取法有單一酶法、復(fù)合酶法和分別酶法。所采用的酶一般為果膠酶、纖維素酶和中性蛋白酶等［25］。夏平等［26］用纖維素酶∶果膠酶＝1∶1的方法提取桑葉中的多糖得到最佳工藝為：溫度50℃、pH4.5，酶用量1.0%，提取1h，提取率為14.32%。此方法對桑葉中的活性物質(zhì)影響較小，且實驗快速。趙俊等［27］發(fā)現(xiàn)超聲波提取法的產(chǎn)量明顯多于水煎煮，且用時少、提取的次數(shù)也少于水煎煮法，所以使用超聲波法提取桑葉多糖值得推廣。黃山等［28］用微波法提取桑葉多糖，獲得的最佳工藝條件：料液比1∶25，溶劑pH8.0，微波功率為300W，微波處理10min，多糖得率為4.26%，比熱水浸提法的得率提高了18.99%［29］。此方法應(yīng)用于植物細(xì)胞破壁，可以使目的物的回收率提高。
2.2桑枝多糖的提取方法
桑枝是養(yǎng)蠶業(yè)的副產(chǎn)物，是一種傳統(tǒng)的中藥，臨床上主要用于關(guān)節(jié)腫痛、手足麻木、風(fēng)濕痹痛、癱瘓等多種疾病的治療［30］?，F(xiàn)代研究表明，桑枝多糖具有降血糖、提高免疫力、抗氧化等藥理活性［31］。因此，從桑枝中提取桑多糖對桑資源利用具有重要的意義。費建明等［32］研究了一般提取法、微波提取法、超聲波提取法和生物酶提取法等多種提取桑枝多糖的方法。確定了一般提取法中的最佳條件：以沸水為提取劑，溶液與材料比為20倍，提取時間為100min，pH5，獲得最高提取率為16.82%，平均提取率為14.54%。用桑枝一般提取法中最佳的提取條件，中間增加間隔微波處理，采用正交試驗法，對功率、時間比例和微波次數(shù)這三個因素設(shè)置三個水平試驗，獲得微波提取的最適條件：微波功率500W，3次微波處理，微波時間為總提取時間的60%，獲得最高提取率為17.22%，平均提取率為15.15%，比一般提取法的最高提取率和平均提取率均有所提高。超聲波提取法與微波提取法的處理方法基本一致，用同樣的三個因素設(shè)置三個水平因素獲得最佳超聲波功率為120W，獲得最高提取率為17.37%，平均提取率為15.27%，同樣比一般提取法提取率高。果膠酶提取法獲得的最高提取率為18.26%，平均提取率17.24，提取率高于以上3種提取方法。
3桑葉、桑枝中生物堿類物質(zhì)
3.1桑葉、桑枝中生物堿類化合物種類
桑生物堿具有良好的降血糖、降血脂、抗病毒、提高免疫力、抗衰老等藥理作用［33］。多羥基生物堿及其苷類化合物集中在桑屬植物的親水性較強部位，常與氨基酸、甜菜堿等其他化合物共存。根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)特點，又可分為多羥基哌啶類、多羥基吡咯烷類和多羥基降托品烷類［34］。1-脫氧野尻霉素（DNJ）是桑樹中的一種生物堿，首先是由Inoue等作為抗生素從鏈霉菌中提取得到，由野尻霉素氫化而來。Yoshiaki從桑中分離出DNJ［35］，桑葉中含量為0.11%［36］。DNJ為桑的特有物質(zhì)，其他植物中也含有，如HangSubkim等［37］從野跖草中分離并鑒定出了DNJ，但其DNJ含量只有0.01125%。Asano等［38］從風(fēng)信子鱗莖利用甲醇提取物中分離到DNJ，含量也只為0.0012%?？梢娚涞腄NJ含量遠(yuǎn)高于其他植物，DNJ是桑樹生物堿特征性、標(biāo)志性的生物堿?，F(xiàn)代藥理實驗證明DNJ在治療糖尿病和抗菌消炎等方面具有良好的作用。有相關(guān)文獻(xiàn)報道，糖尿病已經(jīng)成為僅次于心血管病、癌癥的第三大類導(dǎo)致人類死亡的疾病，具有高致死率、高致殘率和高醫(yī)療花費的特征。世衛(wèi)組織表明全球糖尿病患者已超過4億人，而且數(shù)目呈增長趨勢。中國糖尿病患者人數(shù)達(dá)9700萬以上，數(shù)量為世界第一。糖尿病早已成為當(dāng)前世界各國共同面對的公共健康問題，DNJ又具有明顯的抑制食后血糖急劇升高、延緩糖尿病的發(fā)作和惡化等作用，所以對于DNJ的藥理學(xué)研究已經(jīng)相當(dāng)?shù)亩?。但是，桑葉中DNJ的含量非常少，所以選取提取率高、簡單、快速、操作成本低的提取方法，將為以后的桑葉綜合利用、開發(fā)研制降血糖藥品和保健食品提供良好的技術(shù)支持。
3.2桑葉、桑枝中生物堿類物質(zhì)的提取方法
3.2.1桑葉、桑枝中總生物堿的提取方法
天然有機化合物的提取方法可分為經(jīng)典提取方法和現(xiàn)代提取方法兩種。經(jīng)典提取方法不需要特殊的儀器，簡單、易操作，可降低提取成本，主要包括溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、分子蒸餾法等。其中，溶劑提取法又包括煎煮法、浸漬法、滲漉法、回流提取法、連續(xù)提取法等?，F(xiàn)代提取方法是以現(xiàn)代先進(jìn)的儀器為基礎(chǔ)或新發(fā)展起來的提取方法，主要包括超臨界流體萃取法、超聲波提取法、微波提取法、仿生提取法、酶法提取法、加壓逆流提取法、固相微萃取法等。其優(yōu)點在于縮短了天然產(chǎn)物有效成分的提取時間，同時提高提取效率，但又因這些提取方法大多需要先進(jìn)的儀器或嚴(yán)格的操作技術(shù)，所以普及程度不高。桑中總生物堿提取的常見方法主要有溶劑法、離子交換樹脂法、大孔吸附樹脂法、滲漉—薄膜蒸發(fā)連續(xù)提取法和超臨界流體萃取法等。劉凡等［39］測定98份不同桑樹品種中總生物堿含量，所用方法為：稱取桑葉粉2.000g，提取液為25%乙醇和-0.05mol/L鹽酸，原料質(zhì)量濃度為0.050g/mL，常溫浸提3h，次數(shù)為2次，過濾，合并提取液后濃縮，用HPD-100大孔樹脂過柱，純水進(jìn)行洗脫，洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，以4-羥基哌啶醇為標(biāo)準(zhǔn)物，采用雷氏鹽比色法測定桑葉中的總生物堿的含量，測得結(jié)果表明多數(shù)品種的桑葉總生物堿質(zhì)量比分布在1.50~3.00mg/g之間。劉一衡等［40］使用優(yōu)化超聲法提取新疆藥桑桑葉總生物堿，獲得提取的優(yōu)化工藝條件為：提取時間20min，溫度60℃，料液比1∶20（g/mL），超聲功率為800W，乙醇濃度為60%。在這種條件下，獲得新疆藥桑桑葉總生物堿含量為4.64mg/g。此種方法獲得生物堿比較高，其他桑品種在提取總生物堿時多有借用。
3.2.2桑樹生物堿特征成分1-脫氧野尻霉素（DNJ）的提取方法
DNJ的提取方法比較傳統(tǒng)的有蒸餾水提取法、酸提取法、有機溶劑提取法等，隨著科技的進(jìn)步、實驗儀器的發(fā)展，可在這些傳統(tǒng)方法上施以超聲波、微波等處理，則又有了超聲波提取法和微波提取法等。劉樹興等［41］利用水提法經(jīng)工藝優(yōu)化后獲得最佳提取方案：固液比1∶40，溫度80℃，時間為2.5h。蒸餾水提取很難過濾桑樹中含有的一些果膠等成分，而且用時多，提取率低，所以現(xiàn)在很少使用。馬靜［42］利用酸水解法和有機溶劑提取法相結(jié)合的方法獲得最佳的工藝條件：桑葉粉末粒度為60目，提取溫度為55℃，pH1的50%乙醇溶液，提取時間為1.5h，獲得DNJ的得率為0.062%。此實驗的提取時間有所減少，但是提取量還不理想?；←惖龋?3］利用超聲波強化法獲得最佳工藝條件：超聲功率125W，每克桑葉浸提劑用量為40mL，超聲時所用溫度為70℃，超聲時間為20min，獲得DNJ的得率為0.091%。有文獻(xiàn)表明，微波提取較水蒸氣蒸餾、索氏提取等傳統(tǒng)的中藥提取方法，以及超臨界提取、超聲提取、加速溶劑提取等手段具有一定優(yōu)勢，表現(xiàn)在提取率高，顯示出廣闊的應(yīng)用前景［44］。胡瑞君等［45］利用微波輔助提取技術(shù)獲得最佳實驗條件：微波功率406W、處理時間1.5min，固液比為1∶40，提取2次，提取率為0.024%。
4總結(jié)
4.1優(yōu)選原料
桑葉、桑枝、桑果含有黃酮類、多糖、生物堿類物質(zhì)等重要活性成分，但是否具有產(chǎn)業(yè)化開發(fā)利用的商業(yè)價值和市場前景，主要取決于原料來源、價格和提取率。廣西是我國最大的蠶桑生產(chǎn)省區(qū)，桑葉、桑枝資源豐富，但桑葉中總黃酮、總生物堿含量均小于3.00mg/g。因此，用桑葉提取黃酮類、生物堿類、多糖類物質(zhì)等活性物質(zhì)的成本很高，難以產(chǎn)業(yè)化。桑枝為養(yǎng)蠶的副產(chǎn)物，收獲、干燥、運輸和貯存較為方便，以桑枝為原料提取黃酮類、生物堿類、多糖類物質(zhì)等活性物質(zhì)的成本較低，有利于產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。不同桑品種、不同產(chǎn)地、不同季節(jié)和生長時間的桑枝原料，其活性成分含量有較大差異，研究比較蠶桑產(chǎn)區(qū)現(xiàn)有桑品種、不同季節(jié)和生長時間的桑枝原料中活性成分含量，以評估優(yōu)選原料。
4.2綜合利用，優(yōu)化工藝
桑樹活性物質(zhì)提取和產(chǎn)業(yè)化開發(fā)，應(yīng)以高效、節(jié)能、環(huán)保、安全、多用、高值為目標(biāo)，科學(xué)設(shè)計技術(shù)路線，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，實現(xiàn)同一原料提取多種活性物質(zhì)，開發(fā)多種健康產(chǎn)品，廢渣、廢液循環(huán)利用，以提高綜合經(jīng)濟效益。
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化療是乳腺癌綜合治療的主要手段之一。近年來抗癌新藥、新劑型及聯(lián)合用藥方案不斷發(fā)展，但化療藥物對機體產(chǎn)生的毒副作用，尤其是化療后消化道反應(yīng)和骨髓抑制反應(yīng)，嚴(yán)重影響了病人的化療進(jìn)程、化療藥物使用劑量，甚至導(dǎo)致化療失敗。尋找能有效減輕化療后消化道副反應(yīng)，促進(jìn)骨髓造血功能恢復(fù)和血細(xì)胞回升療效好、毒副作用小、并能預(yù)防骨髓抑制反應(yīng)發(fā)生的治療方法，是提高化療療效、預(yù)防復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。林毅教授是國家人事部、國家中醫(yī)藥管理局確定的第2批繼承工作的老中醫(yī)專家，是享受國務(wù)院特殊津貼的中醫(yī)藥專家，現(xiàn)任中華中醫(yī)外科學(xué)會乳腺病專業(yè)委員會主任委員、“十五”期間乳腺病國家中醫(yī)藥管理局重點專科學(xué)術(shù)帶頭人、廣東省中醫(yī)院乳腺科學(xué)術(shù)帶頭人。其潛心研究乳房疾病四十余載，在中醫(yī)藥治療乳腺癌的臨床和理論上均有獨到之處，積累了豐富的經(jīng)驗?，F(xiàn)將林教授治療乳腺癌圍化療期的辨治思路和用藥經(jīng)驗介紹如下，與同道共鑒。
1 化療前培基固本
化療藥物多為峻猛的熱毒之品，可耗氣傷陰，乳腺癌術(shù)后雖有形之“積”已去，但余毒仍存，此時機體正處于氣血虧虛的狀態(tài)，如化療熱毒之邪與余毒相合，便會更加耗傷氣血，損傷臟腑功能，尤其是脾、肝、腎等臟腑，導(dǎo)致先后天之源枯竭。化療后導(dǎo)致脾胃受損，脾胃不和，升降失調(diào)，濕邪上犯，引起胃滿、納差、惡心、嘔吐等消化道癥狀；由化療導(dǎo)致的骨髓抑制反應(yīng)，在臨床常表現(xiàn)為面色萎黃或白、神疲乏力、氣短聲微、腰膝酸軟、頭暈、目眩、耳鳴、舌淡、邊有齒痕、苔白、脈沉細(xì)無力或舌紅、苔少或無苔、脈細(xì)數(shù)等。林毅教授認(rèn)為中醫(yī)藥治療在乳腺癌圍化療期有著獨特增效減毒的作用，探索效高價廉的治療方法具有重要的臨床意義。她在長期的臨床實踐中體會到圍化療期多為脾胃不和證、氣血（陰）兩虛證、肝腎虧虛證、脾腎兩虛證，宜用健脾和胃，化痰燥濕、益氣養(yǎng)血、健脾補腎之法。為使此時機體能夠耐受化療藥物的熱毒之邪，在化療前1周即應(yīng)開始用藥，培補人體正氣，可為機體迎接化療奠定基礎(chǔ)。
2 化療期調(diào)理脾胃，呵護后天生化之源
患者通常于開始化療后的第2～3天出現(xiàn)胃腸道功能紊亂之反應(yīng)，此時機體運化失司，脾胃受損，脾胃不和，升降失調(diào)，濕邪上犯，引起胃滿、納差、惡心、嘔吐等消化道癥狀?！坝形笟庹呱瑹o胃氣者死” ，此時為脾胃不和、濕濁中阻、濕熱壅盛之證。林毅教授認(rèn)為治療脾虛宜補，痰溫宜化，氣逆宜降，可用香砂六君子湯加減以健脾醒胃，理氣燥濕。習(xí)用：蘇梗15 g，姜制竹茹15 g，黨參15 g，茯苓15 g，淮山藥15 g，炒白術(shù)15 g，廣木香5 g（后下），砂仁10 g（后下），陳皮15 g，法夏15 g，萊菔子15 g，焦三仙各15 g。為使藥物發(fā)揮出最大的療效，呵護后天生化之源，可囑患者每天飲用湯水果汁至少2 000 ml，以促進(jìn)體液循環(huán)，使充足，并使毒邪更多地從汗液、大小便排泄。藥理學(xué)研究證明，黨參、白術(shù)、茯苓能增強機體免疫功能；枳實、砂仁具有促進(jìn)胃腸蠕動的功能。
3 圍化療期密切監(jiān)測血象，積極防治骨髓抑制癥
乳腺癌化療后骨髓抑制癥以白細(xì)胞特別是中性粒細(xì)胞減少最為常見，其次是血小板減少，嚴(yán)重時紅細(xì)胞也受到影響?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)采用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF) 或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）治療白細(xì)胞減少，促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞的分化和增殖，刺激血細(xì)胞進(jìn)入周圍循環(huán)。其作用起效快，下降也快，并隨著化療療程的進(jìn)行，骨髓造血干細(xì)胞的生長來不及補充，可動員的細(xì)胞逐漸減少，用藥后的敏感性下降，需要加大劑量或多次用藥才能奏效。加之治療費用昂貴，臨床使用受到諸多限制。
林毅教授認(rèn)為此癥多屬中醫(yī)“虛勞”“血虛”的范疇，為氣血虧虛、脾腎虧虛之證，常用益氣養(yǎng)血、健脾補腎之法。其在臨證中多選用既符合中醫(yī)辨證，又證實在體內(nèi)有抗癌活性及促進(jìn)免疫功能的藥物，力爭一藥多用，配伍得當(dāng)，相得益彰。張景岳曰：“善補陽者，必于陰中求陽，陽得陰助而生化無窮；善補陰者，必于陽中求陰，則陰得陽升而泉源不竭?！逼幪撜叩幕咎幏綖椋何餮髤?0 g或太子參30 g，淮山藥15 g，云苓15 g，白術(shù)15 g，女貞子15 g，桑椹子15 g，菟絲子15 g，枸杞子15 g，雞血藤60 g，黃精30 g，北芪30 g，陳皮15 g。偏陽虛者的基本處方為：紅參15 g或黨參30 g，淮山藥15 g，云苓15 g，白術(shù)15 g，仙靈脾15 g，補骨脂15 g，女貞子15 g，枸杞子15 g，桑椹子15 g，菟絲子15 g，山萸肉15 g，北芪30 g。對白細(xì)胞明顯減少者，以補氣為重，習(xí)用北芪50g，黨參30g等；對紅細(xì)胞減少者，以補血為重，習(xí)用紫河車30 g，雞血藤60 g，黃精30 g等；對血小板減少者，以益氣養(yǎng)陰為重，習(xí)用北芪50 g，沙參30 g，麥冬15 g，石斛15 g等。臨床上因化療藥物的種類、用量、治療周期不同，引起骨髓抑制反應(yīng)癥狀最重的時間及恢復(fù)時間也有所不同，故應(yīng)密切觀察圍化療期的血象變化，及時調(diào)整用藥，以確保療效?；熐?天及化療的第3，7，14天查血常規(guī)，在辨證與辨病相結(jié)合的基礎(chǔ)上，可參考血象變化規(guī)律調(diào)整用藥。
林毅教授擅用時間醫(yī)學(xué)理論指導(dǎo)服藥時間?！端貑枴ど鷼馔ㄌ煺摗吩疲骸瓣枤庹撸蝗斩魍?，平旦人氣生，日中而陽氣隆，日西而陽氣已虛，氣門乃閉。”說明人體陽氣隨晝夜推移而呈盛衰變化。《靈樞·營衛(wèi)生會》云：“日中而陽隴為重陽，夜半而陰隴為重陰……夜半為陰隴，夜半后而陰衰，平旦陰盡，而陽受氣矣。日中為陽隴，日西為陽衰，日入陽盡，而陰受氣矣。夜半而大會，萬民皆臥，命曰合陰。平旦陰盡而陽受氣，如是無已，與天地同紀(jì)?！闭撌隽巳梭w陰陽氣血隨晝夜變化的規(guī)律。根據(jù)中醫(yī)學(xué)自《內(nèi)經(jīng)》以來“天人相應(yīng)”的整體方法論以及時間醫(yī)學(xué)理論基礎(chǔ)，擇時用藥是調(diào)節(jié)生命節(jié)律以順應(yīng)天地之時而治療疾病的方法，應(yīng)根據(jù)各個藥物的藥性特點、人體生理活動的晝夜節(jié)律，綜合考慮，選擇最佳給藥時間，使陽藥用于陽長之時，陰藥用于陰長之時，陰陽雙補之藥用于陰陽交會之時，更好地發(fā)揮出藥效?！侗静菥V目》曰：“病在胸膈以上者，先食后服藥；病在心腹以下者，先藥后食；病在四肢血脈者，宜空腹而在旦；病在骨髓者，宜飽滿而在夜?！?林毅教授臨床習(xí)用的龜鹿二仙湯加味〔藥用：生龜版50 g（先煎），鹿角膠15 g（烊化），阿膠15 g（烊化），枸杞子15 g，西洋參15 g或紅參15 g，沙參30 g〕，是經(jīng)典的陰陽雙補的名方，選擇在夜晚20:30臨睡前口服，服后于21:00服助眠藥安睡，機體此時陰陽交會，陽氣內(nèi)藏，陰氣隆盛，氣血趨向于里，輸布于內(nèi)臟組織，藥物借營衛(wèi)之氣由陽入陰之際乘勢入里，陰陽雙補，入陰入血，能有效提高骨髓的造血功能，預(yù)防中、重度骨髓抑制癥。
4 化療后飲食調(diào)理
從《神農(nóng)本草經(jīng)》以來的中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論一直把“藥食同源，藥食同用”作為預(yù)防與治療疾病的重要觀點。林毅教授倡導(dǎo)古賢“醫(yī)食同源”之說，非常注重乳腺癌治療中的飲食調(diào)養(yǎng)，認(rèn)為對于乳腺癌等惡性腫瘤，合理適宜的飲食能增加人體的營養(yǎng)，提高抗癌藥物的效果，具有“悅神爽志，以資氣血”的功效。乳腺癌形成之后，大量消耗人體的營養(yǎng)物質(zhì)，加之憂思傷脾，消化吸收功能障礙，特別是經(jīng)手術(shù)或放療、化療后元氣大傷，氣陰兩虧，宜清淡且易消化的補益食物。屬清補的食物主要有山藥、蓮子、百合、蜂蜜、鴨、甲魚、鴨蛋、牛乳、薏苡仁等。屬溫補的食品主要有羊肉、牛肉、狗肉、雞、鴿、鱔魚、海參、桂圓、荔枝、糯米等。和胃降逆、益氣養(yǎng)血之品，如鮮姜汁、甘蔗汁、鮮果汁、桑椹果汁、佛手、番茄、生薏米、黑粳米、白扁豆、靈芝、黑木耳、向日葵子、百合、菌菇類、鱉、龜、烏雞、羊肉、紫河車、桂圓肉及紅棗等對乳腺癌化療患者均宜食用。
摘 要：目的：探討中藥復(fù)方清肺止哮湯對哮喘小鼠氣道炎癥和外周血Th1/Th2平衡的影響。方法：用卵白蛋白(OVA)致敏、激發(fā)建立哮喘小鼠模型。末次抗原激發(fā)后48h收集血、支氣管肺泡灌洗液(BALF)和骨髓標(biāo)本。計數(shù)細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性細(xì)胞(EOB)，檢測外周血Th1/Th2反應(yīng)，以及肺組織學(xué)檢查。結(jié)果：清肺止哮湯可明顯減少BALF中Eos數(shù)，能使肺組織中細(xì)支氣管、血管周圍的Eos浸潤和黏液的過度分泌得到控制，但和布地奈德(BUD)組相比仍有顯著性差異(P＜0.01)。經(jīng)中藥干預(yù)后外周血總的CD+3T細(xì)胞表達(dá)IL－4的細(xì)胞群/表達(dá)IFN－γ的細(xì)胞群與OVA組相比有顯著性差異(P＜0.05)，其中Tc2/Tcl，Th2/Th1呈明顯下降趨勢。結(jié)論：清肺止哮湯能部分抑制哮喘小鼠氣道炎癥，并使外周血CD+3T表達(dá)IFN－γ的細(xì)胞群增加，對于哮喘時Th1/Th2失衡具有一定的糾偏作用。
關(guān)鍵詞：哮喘；動物模型；嗜酸性粒細(xì)胞；清肺止哮湯；Th1/Th2平衡
中圖分類號：R－33 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673－7717(2007)07－1475－04
哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞(Eos)活化并在肺內(nèi)募集所導(dǎo)致的氣道慢性炎癥，并伴有氣流的可逆性受限和氣道高反應(yīng)性，其中最主要的免疫異常是Th1/Th2平衡失調(diào)，Th2細(xì)胞及其所釋放的細(xì)胞因子在誘導(dǎo)哮喘特征性病理生理中起了關(guān)鍵作用。隨著氣道炎癥學(xué)說的確立，抗炎治療得到了廣泛應(yīng)用并在臨床上取得了良好療效。吸入激素具有明顯的抗炎作用，但不能從根本上逆轉(zhuǎn)哮喘的自然病程，不能糾正潛在的免疫失調(diào)，長期使用可引起全身性的不良反應(yīng)。傳統(tǒng)的中醫(yī)中藥已引起了越來越多學(xué)者的廣泛興趣，本研究通過建立穩(wěn)定的小鼠哮喘模型，觀察中藥復(fù)方對哮喘氣道炎癥的抑制作用，并進(jìn)一步運用流式細(xì)胞儀測定外周血細(xì)胞Th1/Th2平衡的變化，以探討其作用機制。
1 材料和方法
1．1 實驗試劑和儀器
卵白蛋白(OVA，美國Sigma公司)，小鼠外周血流式細(xì)胞檢測試劑(包括Anti－mouseCD3e。Anti－mouseCD8a，Anti－mouse IL－4，Anti－mouse IFN－γ，美國BeetonDickinson公司產(chǎn)品)，蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑莫能霉素、刺激劑佛波酯、離子霉素、固定及破膜劑(美國Sigma公司)，佐劑液態(tài)鋁(美國PIERCE公司)，布地奈德霧化液(無錫阿斯特拉公司產(chǎn)品)。儀器主要有便攜式超聲霧化器，石蠟切片機，低溫離心機，光學(xué)顯微鏡，流式細(xì)胞儀。
1．2 實驗藥物及制備
中藥復(fù)方由野蕎麥根30g，黃芩15g，浙貝20g，皂角刺6g，白芍12g，川芎12g，桑椹子15g，補骨脂15g，黃芪15g等組成，委托浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥系制劑室煎制成含生藥2．5g/mL煎劑備用，整個實驗過程均采用同一批制劑。
1．3 動物模型制作及分組
6－8周齡C57BL/6小鼠，雄性，體重18－22g，購自中科院上海動物中心公司。隨機分為4組，每組6－8只：抗原卵白蛋白致敏激發(fā)組(OVA組)、正常對照組(NC組)、布地奈德處理組(BUD組)、中藥復(fù)方處理組。OVA組、BUD組及中藥處理組的小鼠分別于第O和14天腹腔注射OVA致敏液O．2mL/只(含OVA80lag)，于第24、25、26天，分別給予1％OVA霧化液10mL超聲霧化進(jìn)行抗原攻擊，每天1次。正常對照組則以生理鹽水代替OVA以同樣的方法致敏激發(fā)小鼠。中藥組從小鼠第1次致敏當(dāng)天起，以灌胃的方式給藥，每天1次，0.4mL/次，共26天，BUD組則從致敏后第23天起每天1次在乙醚吸入麻醉下予鼻腔內(nèi)滴注BUD，劑量為350μg/kg，共4天。第28天處死各組小鼠，收集標(biāo)本。
1．4 觀察指標(biāo)與方法
1．4．1 BALF動物以2％戊巴比妥腹腔麻醉后在頸前暴露氣管做橫切口，插入改良的18G氣管插管針。用0.7mLPBS液灌洗3次，回收BALF，確?；厥章试?0％以上。離心后收集細(xì)胞作涂片，亞甲基藍(lán)一伊紅染色后計數(shù)細(xì)胞總數(shù)和Eos數(shù)。
1．4．2 骨髓懸液以1.5mL HBSS液緩慢反復(fù)多次沖洗股骨腔，形成單細(xì)胞的混懸液。計數(shù)有核細(xì)胞總數(shù)，同時制備涂片染色后計數(shù)Eos數(shù)。
1．4．3 肺組織學(xué)檢查右肺固定于10％的中性甲醛溶液中，石蠟包埋切片，分別行HE染色和PAS‘染色。
1．4．4 流式細(xì)胞術(shù)測定外周血細(xì)胞中Th1/Th2小鼠腹腔注射肝素抗凝，以2％戊巴比妥腹腔麻醉后沿胸骨剖開，抽取心臟血約0.7mL。取新鮮小鼠外周血0.5mL，運用三色流式細(xì)胞分析法檢測外周血中Th1/Th2細(xì)胞平衡情況。
1．5統(tǒng)計學(xué)分，所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計軟件處理。各組資料以(x±s)表示，進(jìn)行方差分析。P＜0.05作為顯著性差異水平。
2 結(jié) 果
2．1 對BALF中細(xì)胞總數(shù)和Eos絕對值的影響
清肺止哮湯組BALF中細(xì)胞總數(shù)及Eos數(shù)明顯減少，與OVA組相比均有顯著性差異P＜0.01，見表1。對Eos的抑制率．達(dá)到了90％，對細(xì)胞總數(shù)的抑制率達(dá)到了49.8％。
2．2 對骨髓中細(xì)胞總數(shù)和Eos絕對值的影響
運用中藥復(fù)方清肺止哮湯對骨髓中有核細(xì)胞總數(shù)及Eos數(shù)均無明顯抑制作用，與OVA組比較，P＞0.05，見表2。
2．3 肺組織學(xué)結(jié)果
和正常組比較，抗原致敏激發(fā)后在細(xì)支氣管和微血管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤，尤以Eos更為明顯，PAS染色顯示氣道上皮細(xì)胞黏液分泌增加。給予中藥干預(yù)后氣道及血管周圍Eos浸潤得到明顯抑制，氣道黏液分泌得到了控制。經(jīng)過BUD處理的小鼠，其肺組織中支氣管和微血管周圍未見Eos浸潤，抗原誘導(dǎo)的氣道炎癥完全得到了抑制，和正常小鼠肺組織切片基本一致。
2．4 清肺止哮湯與激素的對比研究
經(jīng)中藥干預(yù)后BALF中細(xì)胞總數(shù)及Eos數(shù)，與OVA組相比均有顯著性差異(P＜0.01)，經(jīng)激素BUD干預(yù)后BALF中細(xì)胞總數(shù)及Eos數(shù)，與OVA組相比亦有顯著性差異(P＜0.01)，同時清肺止哮湯BALF中細(xì)胞總數(shù)與BUD組比較無顯著性差異(P＞0.05)，但是，Eos絕對數(shù)和百分比與BUD組比較有顯著性差異(P＜0.05)，結(jié)合肺組織學(xué)結(jié)果，表明清肺止哮湯對哮喘小鼠氣道炎癥的抑制作用是不完全的，和激素比較有差異。中藥對骨髓細(xì)胞總數(shù)不影響，而BUD明顯抑制骨髓細(xì)胞總數(shù)。
2．5 對外周血Th1/Th2細(xì)胞平衡變化的影響
采用流式細(xì)胞分析法檢測外周血中Th/Th2細(xì)胞，結(jié)
果發(fā)現(xiàn)在OVA組，CD+4細(xì)胞中Th2/Th1比值較正常對照組明顯增加(P＜0.01)，顯示了Th1/Th2平衡向Th2優(yōu)勢化，在正常對照組小鼠中Th1細(xì)胞比Th2細(xì)胞多。經(jīng)中藥干預(yù)后結(jié)果顯示外周血總的CD+3T細(xì)胞，包括Tc與Th中表達(dá)IL－4的細(xì)胞群/表達(dá)IFN－γ的細(xì)胞群與陽性對照組相比有顯著性差異(P＜0.01)，其中Th2/Th1、Tc2/Tc1比值呈明顯下降趨勢，但是與OVA組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
3 討 論
支氣管哮喘屬于祖國醫(yī)學(xué)哮證的范疇。臨床上運用中醫(yī)中藥治療哮喘有著悠久的歷史，并且已有報道一些抗哮喘的中藥具有良好的療效。中醫(yī)理論認(rèn)為，哮喘的病因是由于先天稟賦不足，臟腑功能失調(diào)導(dǎo)致宿痰內(nèi)伏于肺，再由外邪入侵、飲食失調(diào)、冷暖不當(dāng)或情志不暢等外因而誘發(fā)。哮喘發(fā)作時，邪盛于肺，但疾病的根源則與腎和脾有關(guān)，肺為氣之主，腎為氣之根，腎虛則不能納氣，致使上下之氣交接失常，加之痰飲搏結(jié)，則哮喘難平，日久肺氣虛損，不能輔心行血，心氣不足，心脈失暢而致瘀。因而肺腎氣虛，痰飲內(nèi)伏是其主要病機，根據(jù)其病理特點，筆者確立了益氣補腎、清肺活血的治療大法，并以此為原則遣藥組成清肺止哮湯。方中黃芪具有益氣固表作用，現(xiàn)代藥理研究證明其含有多種化學(xué)成分，其中苷類有延長細(xì)胞存活，促進(jìn)物質(zhì)代謝，提高免疫功能等活性，桑椹子、補骨脂補腎納氣，輔黃芪益氣化痰，黃芩、野蕎麥根、浙貝、皂角刺清宣肺熱化痰，白芍、川芎養(yǎng)血活血，諸藥合用，共奏益氣補腎，清肺活血之功效，以達(dá)標(biāo)本同治，扶正祛邪之目的。
hs-CRP、TNF-α及IL-6水平均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計W意義（P
【關(guān)鍵詞】 芪棱湯； 阿替普酶； 溶栓； 急性腦梗死； 血清炎性因； 神經(jīng)功能康復(fù)
Effect of Stilbene Rib Soup Combined with Atenolol Enzyme on Serum Inflammatory Factors and Neural Function Recovery in Patients with Acute Cerebral Infarction/LI Min，LIAO Le-le，TANG Gan-yi，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（11）：020-024
【Abstract】 Objective：To observe the effect of Stilbene Rib Soup combined with Atenolol Enzyme on serum inflammatory factors and neural function recovery in patients with acute cerebral infarction.Method：From October 2014 to October 2016，116 acute cerebral infarction patients were divided into the control group and the experimental group according to the different treatment method.The control group was given routine therapy and Atenolol Enzyme intravenous thrombolysis treatment，the experimental group on the basis of the control group was given Stilbene Rib Soup.Neural function recovery of two groups before and after thrombolysis were evaluated by the national institutes of health stroke scale（NIHSS）.Daily life ability of two groups before and after thrombolysis were evaluated by Barthel index.Serum hypersensitive C-reactive protein（hs-CRP），tumor necrosis factor-α（TNF-α） and interleukin-6（IL-6） of two groups before and after thrombolysis were compared.Result：The Barthel index of the experimental group were higher than those of the control group 24 h and 7 d after thrombolysis，NIHSS scores of the experimental group were lower than those of the control group，the differences had statistical significance（P
【Key words】 Stilbene Rib Soup； Atenolol Enzyme； Thrombolysis； Acute cerebral infarction； Serum levels of inflammatory factors； Neural function recovery
First-author’s address：Shenzhen Liuhua Hospital，Shenzhen 518001，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.11.006
急性腦梗死已經(jīng)嚴(yán)重威脅國內(nèi)中老年人的身體健康，其致死率及致殘率均較高，帶給家庭及社會沉重負(fù)擔(dān)[1]。目前臨床溶栓治療主要使用阿替普酶靜脈溶栓，能有效開通血流及改善組織缺血情況。但據(jù)報道，阿替普酶溶栓治療臨床效果差異大及神經(jīng)功能改善不一，這可能與大約30%急性腦梗死患者溶栓后會出現(xiàn)缺血再灌注而造成腦組織的二次損傷有關(guān)[2]。國內(nèi)中醫(yī)研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血一般與腦血管局部血瘀，進(jìn)而引起風(fēng)熱、痰飲、瘀毒等多種病理產(chǎn)物，從而血栓-炎性反應(yīng)的惡性循環(huán)有關(guān)，因此可使用活血化瘀治療此病。而芪棱湯具有抗炎、活血化瘀的功效[3-4]。本次研究主要探討芪棱湯聯(lián)合阿替普酶靜脈溶栓對急性腦梗死患者血清炎性因子和神經(jīng)功能康復(fù)的影響?，F(xiàn)報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 回顧性分析2014年10月-2016年10月于本院溶栓治療的116例急性腦梗死臨床資料，按照治療方案不同將其分為試驗組和對照組，各58例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均診斷為急性腦梗死，且是首次發(fā)?。唬?）發(fā)病時間窗4 h內(nèi)，且均符合溶栓適應(yīng)證；（3）患者家屬均簽署知情同意書，且得到相關(guān)部門批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近3個月有顱腦損傷病史；（2）伴有其他嚴(yán)重性疾病。試驗組：男32例，女26例，年齡46～68歲，平均（56.36±7.35）歲，合并高血壓29例、糖尿病18例、高血脂11例，吸煙12例，喝酒16例；對照組：男35例，女23例，年齡43～67歲，平均（54.89±8.23）歲，合并高血壓31例、糖尿病18例、高血脂9例，吸煙14例，喝酒15例。兩組患者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，患者知情同意。
1.2 治療方法
1.2.1 對照組 （1）給予患者臥床休息、低流量吸氧、維持水和電解質(zhì)平衡、減輕腦水腫及保護和營養(yǎng)腦組織等常規(guī)治療，對伴有高血液、糖尿病或高血脂患者給予積極對癥治療；（2）采用阿替普酶（商品名：愛通立，德國勃林格殷格翰公司公司生產(chǎn)）靜脈溶栓治療，0.9 mg/（kg?d），其中10%在溶栓開始1 min內(nèi)靜脈推注，5 min內(nèi)推完，其余60 min內(nèi)靜脈滴注完；（3）治療14 d。
1.2.2 試驗組 （1）在對照組基礎(chǔ)上靜脈溶栓治療；（2）加服芪棱湯（黃芪、桑椹、天花粉、三棱、水蛭等）1劑/d，水煎服，早晚分服。隨癥加減：氣虛血瘀型加大益氣活血藥物用量，陰虛風(fēng)動型加生地黃、白芍、枸杞子、女貞子，風(fēng)痰阻絡(luò)型加竹瀝、膽南星、法半夏，肝陽暴亢型加鉤藤、石決明、天麻、生牡蠣，兼腹實者加枳實、生大黃，口眼歪斜者加膽南星、白附子、僵蠶，語言不利者加遠(yuǎn)志、石菖蒲、木蝴蝶；（3）治療14 d。
1.3 觀察指標(biāo)與判斷標(biāo)準(zhǔn)
1.3.1 療效判斷 基本治愈：神經(jīng)功能缺損評分減少91%～100%；顯效：神經(jīng)功能缺損評分減少46%～90%；有效：神經(jīng)功能缺損評分減少18%～45%；無效：神經(jīng)功能缺損評分無明顯改變或增加?？傆行?基本治愈+顯效+有效。
1.3.2 NIHSS評分 采用NIHSS評分量表，其中31～42分為重度缺損，16～30分為中度缺損，1～15分為輕度缺損。
1.3.3 Barthel指數(shù) 評價患者日常生活能力包括穿衣、洗澡及進(jìn)食等10項內(nèi)容，總分100分，分?jǐn)?shù)越高代表日常生活能力越強。
1.3.4 炎性因子檢測 溶栓前、溶栓后24 h及溶栓后7 d采集患者晨起空腹靜脈血，TNF-α及IL-6采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法，hs-CRP水平采用貝克曼特定蛋白儀利用散射比濁原理檢測。
1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 x2檢驗。以P
2 結(jié)果
2.1 兩組溶栓前后Barthel指數(shù)與NIHSS評分比較 溶栓后24 h，試驗組患者Barthel指數(shù)明顯高于對照組，而NIHSS評分明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P
2.2 兩組溶栓前后炎性因子水平比較 溶栓后24 h、7 d，試驗組患者h(yuǎn)s-CRP、TNF-α及IL-6水平均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P
2.3 兩組療效比較 試驗組基本治愈率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P
3 討論
急性腦梗死后缺血-再灌注時，缺血區(qū)會聚集炎性細(xì)胞而引起炎癥反應(yīng)，使微循環(huán)障礙加劇[5]。有研究顯示，炎性因子與急性腦梗死患者預(yù)后有很強的關(guān)系，并被認(rèn)為是缺血性腦卒中的本質(zhì)[6]。有研究表明，患者梗死面積、病情輕重均與hs-CRP、IL-6、TNF-α水平有關(guān)。有研究提出急性腦梗死治療應(yīng)該以神經(jīng)血管單元為靶點的方式，而成分復(fù)雜的中成藥較多涉及治療靶點，闡明中成藥治療急性腦梗死的臨床效果顯著[7-9]。本次研究芪棱湯對急性腦梗死治療效果，旨為中成藥的臨床應(yīng)用提供有利證據(jù)。
本研究主要通過探討單用阿替普酶和阿替普酶聯(lián)合芪棱湯治療對急性腦梗死患者血清炎性因子和神經(jīng)功能康復(fù)方面的影響。阿替普酶在治療急性腦梗死時發(fā)揮很重要的作用，其與血栓中的網(wǎng)狀纖維蛋白結(jié)合后能激活纖溶酶原，使纖溶酶增加，而后打斷纖維蛋白網(wǎng)，使血栓溶解，結(jié)束整個過程后，纖溶酶與α-抗纖溶酶結(jié)合后會失活[10-11]。研究顯示，阿替普酶能使急性腦梗死患者缺血的腦組織再灌注，而改善患者早期神經(jīng)功能缺損及提高生存質(zhì)量[12]。有研究顯示，阿替普酶能有效降低患者血清中炎性因子[13]。本次研究結(jié)果顯示，單使用阿替普酶治療急性腦梗死時，Barthel指數(shù)明顯升高，而NIHSS明顯降低，證明了阿替普酶有效改善患者神經(jīng)功能缺損及生活質(zhì)量，此外結(jié)果還顯示，溶栓后對照組患者h(yuǎn)s-CRP、IL-6、TNF-α有明顯降低（P
綜上所述，芪棱湯聯(lián)合阿替普酶靜脈溶栓治療能明顯改善急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度，提高患者日常生活能力及能顯著降低患者炎性因子水平，且臨床治療效果更加顯著。
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