免疫學(xué)的定義精選(九篇)

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第1篇：免疫學(xué)的定義范文

【關(guān)鍵詞】 免疫固定電泳；M蛋白；β巰基乙醇

M蛋白是漿細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞單克隆惡性增殖分泌的大量結(jié)構(gòu)均一的， 無抗體活性和無免疫活性免疫球蛋白或其肽鏈亞單位， 臨床上稱之為單克隆免疫球蛋白（monoclonal proteins， M蛋白）[1]。免疫固定電泳技術(shù)是結(jié)合區(qū)帶電泳的分離作用和單克隆抗體的特異性及高敏感性來檢測樣本中的單克隆免疫球蛋白[2]。此技術(shù)在惡性單克隆免疫球蛋白血癥的診斷、分型、療效隨訪和意義未名單克隆免疫球蛋白血癥轉(zhuǎn)化的病程監(jiān)測都有重要意義。

1 血清免疫固定電泳常見問題

①抗原抗體比例不合適 免疫增殖性疾病中會(huì)出現(xiàn)某種或幾種免疫球蛋白異常增高， 高濃的球蛋白使血清免疫固定電泳某個(gè)球蛋白區(qū)出現(xiàn)有著色較深的濃密條帶或出現(xiàn)邊緣著色而中心區(qū)域蛋白不著色的“口型”。著色較深的濃密條帶的出現(xiàn)會(huì)使判讀很困難， 是否有單克隆條帶隱匿在其中不容易判讀；還是此樣本為一個(gè)多克隆免疫球蛋白病無法區(qū)分。“口型”容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。② IgM型聚合度高， 非特異性沉淀影響判讀， 在β或γ區(qū)可見致密而均質(zhì)條帶。第一種情況凝膠的點(diǎn)樣處和整個(gè)泳道出現(xiàn)沉淀。另一種情況是出現(xiàn)兩條單克隆帶。③IgA型譜帶寬而彌散， IgA型較其他類型的單克隆比較譜帶寬而彌散不易判讀。④血清免疫固定只有重鏈單克隆成分， 初診時(shí)血清免疫固定只有重鏈單克隆成分勿輕易診斷為重鏈病。⑤血清免疫固定只有輕鏈單克隆成分。⑥血清免疫固定電泳陰性的漿細(xì)胞病， 臨床上典型的漿細(xì)胞病特征及病理損傷， 但血清免疫固定電泳為陰性。⑦血清免疫固定的血清蛋白電泳條帶假的狹區(qū)帶易與M蛋白混淆。以上討論了對(duì)血清免疫固定電泳技術(shù)在日常工作中常見問題， 現(xiàn)就其問題逐一分析和解決。

2 分析與討論

①高濃度的球蛋白需要考慮提高抗體濃度或降低抗原的濃度， 一般采用生理鹽水降低抗原濃度的方法[3]。掌握正確的適合自己實(shí)驗(yàn)室試劑盒的稀釋比例， 最好先進(jìn)行免疫球蛋白及輕鏈的定量。因免疫固定電泳的檢測靈敏度可達(dá)0.25 g/L， 恰當(dāng)?shù)南♂尡壤谀z片上會(huì)呈現(xiàn)清晰且濃而狹窄界限明顯的沉淀線即單克隆免疫球蛋白。②由于大量IgM多以19 S五聚體形式存在， 造成凝膠的點(diǎn)樣處和整個(gè)泳道出現(xiàn)沉淀的情況。19 S五聚體伴隨7 S單體亞單位會(huì)造成兩條單克隆帶[4]。這兩種情況經(jīng)β巰基乙醇處理會(huì)使大分子聚合蛋白解聚和適當(dāng)?shù)南♂屇艿玫嚼硐氲膯慰寺l帶。β巰基乙醇使用濃度為100 μl標(biāo)本中加入10 μl10%的β巰基乙醇。另需注意β巰基乙醇毒性分級(jí)為高毒且具有特殊臭味， 高濃度吸入本品有致人死亡危險(xiǎn)， 有條件的話可在通風(fēng)櫥中戴手套操作。③由于IgA分子的多態(tài)性形成的二聚體和三聚體導(dǎo)致蛋白質(zhì)的不同遷移率[5]。使IgA型單克隆免疫球蛋白病呈現(xiàn)多條帶的現(xiàn)象。在不能清晰判讀的情況下可以用經(jīng)β巰基乙醇處理使大分子聚合蛋白解聚和適當(dāng)?shù)南♂尩慕饩鄯椒?。④有些M蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)會(huì)阻礙輕鏈抗原決定簇與其相應(yīng)的輕鏈抗血清的結(jié)合， 此時(shí)可經(jīng)β巰基乙醇處理使大分子聚合蛋白解聚和適當(dāng)?shù)南♂尩慕饩鄯椒ǎ?再做實(shí)驗(yàn)?zāi)艿玫秸_的結(jié)果。⑤若與三種重鏈α， γ， μ不發(fā)生反應(yīng)而與κ或λ輕鏈反應(yīng)， 則需進(jìn)一步作游離輕鏈的補(bǔ)充檢測。若呈陰性結(jié)果， 則需再做抗IgD和抗IgE檢測。⑥第一種為不分泌型多發(fā)性骨髓瘤；第二種為輕鏈型多發(fā)性骨髓瘤， 由于輕鏈的分子量較小易迅速自腎排除故有時(shí)血清中反而呈現(xiàn)陰性。這種情況可用本-周蛋白的檢測或尿固定電泳來檢測輕鏈的單克隆成分的有無。⑦溶血標(biāo)本在β位會(huì)形成血紅蛋白區(qū)帶；陳舊血清在近原位由于IgG的聚合形成的窄區(qū)帶；血漿標(biāo)本在r位會(huì)形成纖維蛋白原帶[6]。以上3種情況可通過樣本的質(zhì)量前控制， 用新鮮血清標(biāo)本可以避免此類情況的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

[1] 侯建.M蛋白的鑒定及結(jié)果分析.中華血液學(xué)雜志， 2002， 23 （10）：559-560.

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[3] 從玉隆.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社， 2009：684-689.

[4] 朱鑒清.電泳技術(shù)臨床應(yīng)用.遼寧：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社， 2006：82-91.

[5] 張亨.巰基乙醇的性質(zhì)、生產(chǎn)及應(yīng)用.杭州化工， 2003， 33（3）： 22.

第2篇：免疫學(xué)的定義范文

2015年7月3日14時(shí)許，孫某（男，43歲）駕駛一輛電動(dòng)三輪車行至遼寧省營口市老邊區(qū)305國道金牛山大街南富璽鋼材城路口附近路段時(shí)與一輛翻斗車相撞后受傷，經(jīng)醫(yī)院搶救無效于2015年7月5日16：40左右死亡。

2臨床資料

現(xiàn)病史：患者于1h前車禍中傷及頭面部及胸部，傷后意識(shí)不清，頭面部創(chuàng)口流血，無惡心及嘔吐，無抽搐及二便失禁，急診行CT檢查后收入病房。病來無尿痛及血尿，無腹瀉及便秘，未進(jìn)食水。體格檢查：T36.5℃，P81次/min，BP108/60mmHg， R18次/min。專科檢查：昏睡狀態(tài)，問話不答，雙側(cè)瞳孔等大正圓，直徑2.5mm，光反射靈敏，頭面部創(chuàng)口敷料包扎，無血性液滲出，無面癱，耳鼻無溢液，頸軟，雙肺呼吸音清，心率70次/min，腹平軟，無反跳痛，左側(cè)肢體癱，肌力Ⅲ級(jí)，雙膝腱反射正常，雙巴氏征陰性。2015年7月4日CT診斷：左側(cè)大面積腦梗塞可能性大，左側(cè)額頂部軟組織腫脹。請(qǐng)結(jié)合臨床。2015年7月4日11：20～13：40手術(shù)記錄：…。手術(shù)名稱：左側(cè)標(biāo)準(zhǔn)大骨瓣減壓術(shù)?！?。術(shù)中診斷：左側(cè)外傷性大面積腦梗塞，腦疝…。確定診斷：左側(cè)外傷性大面積腦梗塞，腦疝，頭面部皮裂傷，頸部皮裂傷，腦震蕩。

3法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)

3.1尸表檢驗(yàn) 成人男性尸體一具，尸身長170cm，發(fā)育正常，營養(yǎng)良好。尸斑呈淡紅色，分布于尸體背側(cè)未受壓部分，指壓不褪色；尸僵已形成，存在尸體各大關(guān)節(jié)，程度較強(qiáng)。頭部戴網(wǎng)狀止血紗帽，頭頂部敷料包扎在位伴有血染。顏面蒼白，雙眼瞼閉合，瞼球結(jié)膜蒼白，角膜輕度混濁，雙側(cè)瞳孔不等大、正圓固定，其中左側(cè)直徑0.5cm，右側(cè)直徑0.6cm，舌位于齒列內(nèi)，口、鼻腔及雙側(cè)外耳道未見異常分泌物。

3.2損傷檢驗(yàn)

3.2.1前額面部正中近發(fā)際處經(jīng)左額部、頂部至左顳部有一“U”型長28.0cm開顱術(shù)后創(chuàng)口，已縫合，縫線在位。

3.2.2左頂部有一0.8cm×0.3cm閉式引流術(shù)后創(chuàng)口，已縫合，縫線在位。

3.2.3左額顳部有一不規(guī)則形態(tài)8.0cm×0.2cm-2.0cm表皮剝脫伴皮下出血，其中有兩處分別長1.8cm、4.0cm創(chuàng)口，已縫合，縫線在位。

3.2.4右額面部有一2.5cm×1.0cm表皮剝脫伴皮下出血，局部小創(chuàng)口已縫合，縫線在位。

3.2.5右眼周、右顴部可見多處細(xì)小創(chuàng)口，均已縫合，縫線在位。

3.2.6下頜底至左頸部有一14.0cm×0.5cm-3.0cm不規(guī)則形態(tài)表皮剝脫伴皮下出血，其中可見多處皮膚裂傷，已縫合，縫線在位。

3.2.7左肘背部可見兩處表皮剝脫伴皮下出血，大小分別為1.1cm×1.6cm、0.2cm-0.6cm×1.1cm。

3.2.8右大腿中下段前外側(cè)可見兩處皮下出血，大小分別為6.0cm×1.0cm、7.0cm×1.5cm。

3.3解剖檢驗(yàn)

3.3.1頭部 常規(guī)切開頭皮，見左側(cè)頭皮下出血，面積在11.0cm×10.0cm左右，左側(cè)標(biāo)準(zhǔn)大骨瓣減壓術(shù)后，顱骨缺損面積在10.0cm×10.0cm左右，人工硬腦膜縫合在位，右側(cè)顳肌無出血。鋸開顱骨，見硬膜外無出血，剪開硬腦膜，未見硬膜下出血，取出腦組織，可見左側(cè)大腦少量薄層蛛網(wǎng)膜下腔出血，切開左側(cè)大腦實(shí)質(zhì)，可見多處散在腦挫裂傷灶，切開腦干左側(cè)實(shí)質(zhì)有處挫傷、出血灶。顱底左側(cè)顱后窩頸內(nèi)動(dòng)脈管入口處可見一長約5.0cm血栓樣物附著。

3.3.2頸部 “一”字縱行切開頸前區(qū)皮膚，未見頸部肌肉出血，在頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈分叉處切開動(dòng)脈可見血栓樣物堵塞頸內(nèi)動(dòng)脈管腔，肉眼觀察動(dòng)脈管壁未見粥樣硬化斑塊形成。

3.3.3胸腹部 “一”字縱行聯(lián)合切開胸腹部皮膚，分離軟組織，胸壁軟組織及肋間肌未見破裂及出血，肋骨無骨折，氣胸試驗(yàn)陰性。鋸開兩側(cè)肋骨，左右胸腔內(nèi)未見積液、積血，心包完整無破裂，剪開心包，心包內(nèi)可見少量淡黃色心包液，心臟完整無破裂，心臟漿膜下可見多處散在出血點(diǎn)（斑），右肺下葉可見多處散在出血點(diǎn)（斑）。腹腔內(nèi)無積液、積血，各臟器位置正常，完整無破裂。其他未見明顯異常。

3.4提取檢材及處理 提取死者孫某全腦組織、心臟、部分左肺下葉、右肺上葉、左頸總動(dòng)脈頸內(nèi)動(dòng)脈、部分肝左葉、脾臟、左腎臟等臟器組織，待送檢做法醫(yī)病理組織學(xué)檢驗(yàn)。

3.5病理組織學(xué)檢驗(yàn) 主要法醫(yī)病理學(xué)診斷及所見

3.5.1左側(cè)大腦散在蛛網(wǎng)膜下腔出血，對(duì)應(yīng)部位腦實(shí)質(zhì)多發(fā)散在灶狀出血，呈外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血及腦挫傷改變；左側(cè)大腦實(shí)質(zhì)內(nèi)多發(fā)散在血管內(nèi)膜斷裂、血栓形成伴血栓周圍腦組織梗死灶形成；

3.5.2腦干中心部位大片狀出血伴腦干水腫。

3.5.3左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷，內(nèi)皮斷裂、脫落，管腔內(nèi)有混合血栓形成。

3.5.4心臟冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜輕度增厚，管腔未見狹窄；肺臟、肝臟、腎臟和脾臟鏡下未見明顯異常。

4討論

4.1關(guān)于外傷性腦梗塞 外傷性腦梗塞是頭部或頸部外傷引起腦血管堵塞或閉塞所致的腦組織缺血性壞死。其損傷原因和機(jī)制一般認(rèn)為與以下因素有關(guān)：①血管痙攣。多為原有病變（如動(dòng)脈硬化等）的腦血管，在外力作用、腦損傷或精神創(chuàng)傷刺激下引起反射性腦血管痙攣；②血栓形成。外力造成頸部動(dòng)脈或腦內(nèi)血管內(nèi)膜損傷；③栓塞。栓子多為動(dòng)脈內(nèi)附壁血栓或動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。

它是外傷，尤其是顱腦外傷的一種較少見的并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為原發(fā)腦損傷不相符合的遲發(fā)性神經(jīng)功能障礙，且易與病理性腦梗塞相混淆，在法醫(yī)學(xué)鑒定中常引起爭議。

4.2關(guān)于本例成傷機(jī)制 本例頭頸部交通事故外傷史明確，傷后意識(shí)不清，出現(xiàn)左側(cè)肢體癱，肌力Ⅲ級(jí)，頭部CT檢查提示左側(cè)多發(fā)大面積腦梗塞，經(jīng)臨床搶救無效于傷后50余h死亡。

本例尸表檢驗(yàn)見頭、頸部多處表皮剝脫伴皮下出血、挫裂傷，解剖頭部可見左側(cè)大腦少量蛛網(wǎng)膜下腔出血，左側(cè)腦實(shí)質(zhì)內(nèi)多處散在腦挫裂傷灶，腦干實(shí)質(zhì)內(nèi)有處挫傷、出血灶，并于顱底左側(cè)顱后窩頸內(nèi)動(dòng)脈管入口處可見一長約5.0cm疑似血栓樣物附著，解剖頸部于頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈分叉處剪開頸內(nèi)動(dòng)脈管壁，可見血栓樣物堵塞頸內(nèi)動(dòng)脈管腔，肉眼觀察動(dòng)脈管壁未見粥樣硬化斑塊形成。病理組織學(xué)檢查所見左側(cè)大腦可見多處散在外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血及腦挫傷改變，左側(cè)大腦實(shí)質(zhì)內(nèi)多發(fā)散在血管內(nèi)膜斷裂、血栓形成伴血栓周圍腦組織梗死灶形成，腦干中心部位大片狀出血伴腦干水腫，左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)膜損傷，內(nèi)皮斷裂、脫落，管腔內(nèi)有混合血栓形成，心臟冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜輕度增厚，管腔未見狹窄。因此，可以認(rèn)定本例左側(cè)大面積腦梗塞不屬于自身病理性腦梗塞，應(yīng)屬外傷性腦梗塞。

本例頭頸部外傷造成頸部動(dòng)脈和腦內(nèi)血管發(fā)生牽拉、扭曲，造成內(nèi)膜斷裂、出血，血管內(nèi)皮損傷后，內(nèi)皮膠原纖維暴露，激活血液中凝血因子Ⅷ，從而激活內(nèi)源性凝血系統(tǒng)，同時(shí)內(nèi)膜損傷所釋放的組織凝血因子又可以激活外源性凝血系統(tǒng)，促進(jìn)血栓形成。此外，顱腦外傷后腦挫裂傷、腦內(nèi)血腫、腦水腫，導(dǎo)致顱內(nèi)壓增高，使腦血管灌注量下降、腦血流緩慢、瘀滯，也有助于血栓形成。

4.3關(guān)于本例死亡原因 本例頭、頸部交通事故外傷史明確，損傷致頭、頸部多處表皮剝脫伴皮下出血、挫裂傷，解剖檢見頭皮下血腫，蛛網(wǎng)膜下腔出血，左側(cè)多處散在腦挫裂傷灶，腦干出血，左側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈血栓形成，導(dǎo)致大面積外傷性腦梗塞，腦內(nèi)水腫，腦疝形成。死者孫某符合交通事故致頭頸部外傷、頸內(nèi)動(dòng)脈血栓形成，導(dǎo)致大面積腦梗塞、繼發(fā)腦疝形成造成嚴(yán)重的顱腦損傷而死亡。

第3篇：免疫學(xué)的定義范文

[關(guān)鍵詞] 單向免疫擴(kuò)散；流感病毒疫苗；血凝素；亞單位；去垢劑

[中圖分類號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2012）02（c）-0049-03

Influence of detergent in the measurement of haemagglutinin content of influenza vaccine by single radial immunodiffusion

TIAN Wenli QI Ji GAO Yanyan CHEN Qun YANG Xu LI Xiaoqiang

Tasly & Jenner (Tianjin) Co., Ltd, Tianjin 300410, China

[Abstract] Objective To research the influence of detergent in single radial immunodiffusion (SRID) test for the assay of haemagglutinin on different influenza vaccine intermedia products, and to determine the disintegration terms treating with detergent. Methods Examined the haemagglutinin content by single radial immunodiffusion assay after treating whole virus and subunit vaccine intermedia products with a variety of concentration and taking time of detergent, compared and analyzed on the measurement data. Results Size of the subunit vaccine diffusion zones increased with increasing concentrations of Zwittergent reaching 0.125%, and kept consistent with detergent concentrations higher than 0.125%. However, size of the whole virus diffusion zones increased until the detergent concentrations reach 1%. The result of haemagglutinin content did not varied by treating with 1% Zwittergent for 30, 60, and 120 min, there were no significant difference among the detergent results. Conclusion Treating with 1% Zwittergent for 30 min is proper for either whole virus or subunit vaccine intermedia products in single radial immunodiffusion for haemagglutinin assay, it is good for increasing the job efficiency, decreasing the experimental error and saving the experimentation costs.

[Key words] Single radial immunodiffusion (SRID); Influenza vaccine; Haemagglutinin(HA); Subunit; Detergent

流感病毒的囊膜外層分布著兩種主要的抗原物質(zhì)：血凝素（haemagglutinin，HA）和神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase，NA）[1-2]。研究表明，血凝素在流感病毒感染宿主細(xì)胞的過程中起著至關(guān)重要的作用[3]，是流感病毒亞單位疫苗中有效的免疫物質(zhì)[4-6]。因此，血凝素含量的準(zhǔn)確測定是流感病毒疫苗制品質(zhì)量控制的關(guān)鍵。目前，國際上通用的流感病毒血凝素含量測定方法是單向免疫擴(kuò)散法（single radial immunodiffusion，SRID）[7-12]，該方法不僅應(yīng)用于流感病毒亞單位疫苗成品的血凝素含量測定，在疫苗制品生產(chǎn)的中間過程控制中也起著至關(guān)重要的指導(dǎo)作用。

在流感病毒亞單位疫苗的生產(chǎn)過程中，首先制備出大量的完整病毒，然后經(jīng)裂解、純化等若干處理后獲得亞單位疫苗[13]。為了在疫苗制品的生產(chǎn)過程中對(duì)不同階段的中間產(chǎn)品進(jìn)行必要的質(zhì)量控制，就需要對(duì)不同組成成分的中間產(chǎn)品進(jìn)行血凝素含量的檢測。這些中間產(chǎn)品既包括未裂解的完整病毒也包括經(jīng)過裂解、純化的亞單位產(chǎn)品。因此，確定一種能夠同時(shí)對(duì)完整病毒和亞單位疫苗進(jìn)行血凝素含量測定的單向免疫擴(kuò)散法對(duì)于疫苗生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 疫苗中間產(chǎn)品和標(biāo)準(zhǔn)抗原/抗血清

流感病毒疫苗中間產(chǎn)品：完整病毒液及亞單位疫苗原液由天士力金納生物技術(shù)（天津）有限公司生產(chǎn)；標(biāo)準(zhǔn)抗原/抗血清均購自NIBSC。

1.2 主要試劑

瓊脂糖（BIOWEST）；去垢劑：Zwittergent 3-14 Detergent（Merck）；染色液（0.4%考馬斯亮藍(lán)R250）；脫色液（無水乙醇∶冰醋酸∶水=29∶12∶59）。

1.3 抗原樣本的處理

1.3.1 去垢劑濃度的比較 將A/Victoria/210/09（H3N2）（NYMCX-187）標(biāo)準(zhǔn)抗原、完整病毒液1、亞單位疫苗原液1三個(gè)抗原樣本以抗原：去垢劑=9∶1的體積比分別加入濃度為0.375%、0.625%、1.25%、2.5%、5.0%、10.0%、20.0%（w/v）的去垢劑，以PBS代替去垢劑等體積加入，作為去垢劑濃度為0的對(duì)照。3組抗原樣本各經(jīng)八個(gè)濃度（終濃度分別為0、0.037 5%、0.062 5%、0.125 0%、0.250 0%、0.500 0%、1.000 0%、2.000 0%）的去垢劑在室溫下裂解30 min后同時(shí)加至抗體凝膠板中進(jìn)行SRID。

1.3.2 裂解時(shí)間的比較 取A/Victoria/210/09 （H3N2）（NYMCX-187）標(biāo)準(zhǔn)抗原和亞單位疫苗原液2，分別加入1/9體積的10%（w/v）去垢劑，在室溫條件下分別放置不同時(shí)間進(jìn)行裂解。其中，各裂解時(shí)間組的標(biāo)準(zhǔn)抗原均稀釋為1、0.75、0.50、0.25倍濃度，完整病毒液2和亞單位疫苗原液2分別稀釋12倍和15倍后進(jìn)行裂解。所有抗原樣本經(jīng)處理后同時(shí)加至抗體凝膠板中進(jìn)行SRID。

1.4 SRID實(shí)驗(yàn)

用PBS配制1%瓊脂糖溶液，加熱融化后降溫至45℃，按說明書中的建議量加入標(biāo)準(zhǔn)抗血清，混勻后傾注在擴(kuò)散板上（凝膠厚度為2 mm），待瓊脂糖溶液凝固后用4 mm直徑的打孔器打孔并除去孔內(nèi)凝膠，即為抗體凝膠板。

向抗體凝膠板的各加樣孔中分別加入18 μL處理后的抗原樣本，將凝膠板置于濕盒內(nèi)室溫?cái)U(kuò)散至少18 h。凝膠經(jīng)漂洗、壓薄、干燥后進(jìn)行染色、脫色，測量沉淀圈直徑[8]。

2 結(jié)果

2.1 去垢劑濃度的比較

將標(biāo)準(zhǔn)抗原、完整病毒液1、亞單位疫苗原液1三個(gè)抗原樣本分別以終濃度為0、0.037 5%、0.062 5%、0.125 0%、0.250 0%、0.500 0%、1.000 0%、2.000 0%的去垢劑于室溫下同時(shí)裂解30 min后進(jìn)行SRID，測量沉淀圈直徑，然后根據(jù)三組樣本的沉淀圈直徑繪圖，見圖1。

從3條曲線的形態(tài)可以看出，去垢劑終濃度由0增加至0.125%時(shí)，3種抗原的沉淀圈均逐漸增大；當(dāng)去垢劑濃度由0.125%增至2.00%時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)抗原和亞單位疫苗的沉淀圈直徑無明顯變化，而完整病毒的沉淀圈仍隨去垢劑濃度的增大而變大，直到去垢劑終濃度達(dá)到1%時(shí)，才不再增大。這說明不論是標(biāo)準(zhǔn)抗原、亞單位疫苗還是完整病毒，在進(jìn)行SRID實(shí)驗(yàn)前都需要進(jìn)行裂解；標(biāo)準(zhǔn)抗原和亞單位疫苗因?yàn)槭孪榷冀?jīng)過了一定的裂解過程，故需要的去垢劑濃度較低（0.125%），而完整病毒則需要使用較高濃度（1%）的去垢劑才能夠充分裂解。

圖1中亞單位疫苗與標(biāo)準(zhǔn)抗原兩條曲線幾乎是平行的，這說明去垢劑濃度的變化對(duì)該亞單位疫苗與標(biāo)準(zhǔn)抗原的影響是一致的。經(jīng)過終濃度不小于0.125%的去垢劑裂解后，利用SIRD的方法以標(biāo)準(zhǔn)抗原作為參考品來測定該工藝條件下生產(chǎn)的亞單位疫苗的血凝素含量能夠得到穩(wěn)定而準(zhǔn)確的結(jié)果。去垢劑終濃度由0增加到2%時(shí)完整病毒SRID沉淀圈直徑增加了5.2 mm，而亞單位疫苗與標(biāo)準(zhǔn)抗原的沉淀圈僅增加了2.9 mm和2.8 mm。可見，去垢劑濃度的變化對(duì)完整病毒的作用最為顯著。當(dāng)利用SRID的方法以標(biāo)準(zhǔn)抗原作為參考品來測定完整病毒中的血凝素含量時(shí)，樣本處理所需要的去垢劑終濃度不應(yīng)小于1%。

2.2 裂解時(shí)間的比較

標(biāo)準(zhǔn)抗原稀釋為四個(gè)濃度與稀釋的亞單位疫苗原液共同進(jìn)行三組裂解時(shí)間的比較，SRID測得的沉淀圈直徑見表1。

利用SRID的沉淀圈直徑與抗原濃度呈線性的關(guān)系分別對(duì)3組裂解時(shí)間所得到的結(jié)果做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將3組中分別測得的完整病毒液2和亞單位疫苗原液2的沉淀圈直徑代入公式中，計(jì)算其血凝素含量，見表2。

由表1和表2可見，標(biāo)準(zhǔn)抗原和亞單位疫苗SRID沉淀圈直徑均不隨裂解時(shí)間的變化而發(fā)生顯著變化。因此，在3組裂解時(shí)間下分別測得的完整病毒液血凝素含量（CV=0.2%）和亞單位疫苗原液血凝素含量（CV=1.3%）的結(jié)果都是一致的。

3 討論

單向免疫擴(kuò)散（SRID）實(shí)驗(yàn)應(yīng)用于流感病毒血凝素含量的檢測是一種非常成熟、有效的方法，該方法具有靈敏度高、精確性好、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，是《中國藥典》2010年版三部中用于流感病毒疫苗血凝素含量檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法。而該方法中，樣本裂解的充分與否是影響測定結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。

本文以流感病毒疫苗生產(chǎn)過程中不同生產(chǎn)階段的中間產(chǎn)品作為樣本，研究了利用單向免疫擴(kuò)散法測定樣本血凝素含量時(shí)去垢劑的影響。本研究的結(jié)果表明，完整病毒或亞單位疫苗以終濃度1%的去垢劑對(duì)抗原樣本進(jìn)行30 min的裂解處理后，均能在單向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中得到穩(wěn)定準(zhǔn)確的結(jié)果。去垢劑濃度低于1%時(shí)，完整病毒裂解不充分，進(jìn)行單向免疫擴(kuò)散所得的沉淀圈偏??；而去垢劑濃度高于1%時(shí)，完整病毒和亞單位疫苗的SRID沉淀圈直徑均不隨去垢劑濃度的增加而發(fā)生變化。此外，裂解時(shí)間的延長不會(huì)對(duì)血凝素含量的測試結(jié)果產(chǎn)生影響。

完整病毒未經(jīng)過裂解，抗原顆粒較大，在SRID中不易擴(kuò)散；亞單位疫苗經(jīng)過了一定的裂解處理，抗原顆粒較小，相對(duì)于完整病毒顆粒更易于擴(kuò)散；而亞單位疫苗經(jīng)去垢劑處理后可進(jìn)一步裂解為顆粒更小的抗原物質(zhì)，在SRID中最易擴(kuò)散，裂解劑濃度比較的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也充分證明了這一點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)抗原與亞單位疫苗相似，也需要經(jīng)去垢劑裂解后進(jìn)行SRID。

在大規(guī)模流感病毒疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制工作中，經(jīng)常需要對(duì)大量的不同階段中間產(chǎn)品樣本進(jìn)行檢測。利用本研究所確定的樣本處理?xiàng)l件，可同時(shí)對(duì)多種待測抗原樣本進(jìn)行血凝素含量的測定，對(duì)于提高工作效率、縮小實(shí)驗(yàn)間誤差、節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本等方面都具有非常重要的意義。

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第4篇：免疫學(xué)的定義范文

[關(guān)鍵詞] 電化學(xué)發(fā)光法；放射免疫法；甲狀腺激素

[中圖分類號(hào)] R446.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）03-0071-02

Comparing of measurement of thyroid hormones by ECLIA and RIA

ZHANG Yuping

Deparment of Clinical Laboratory, the Affiliated Hospital of Xinyang Vocational and Technical College, Xinyang 464000, China

[Abstract] Objective To compare which one is superiority in result of reliability and methodology of convenience between ECLIA and RIA measurement. Methods The thyroid hormones were measured by ECLIA and RIA. The measurements were compared of precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range and others. Results Precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range of ECLIA have had an advantage over RIA. Conclusion ECLIA is an outstanding method applied in clinical laboratory.

[Key words] ECLI; RIA; Thyroid hormones

放射免疫法（RIA）檢測成本低，但具有報(bào)告時(shí)間長、結(jié)果不穩(wěn)定、同位素污染等缺點(diǎn)，漸趨于淘汰。近年來隨著檢測分析技術(shù)的發(fā)展，電化學(xué)發(fā)光（ECLI）分析法日益受到關(guān)注，本文分別采用2種方法對(duì)甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和20份患者血清甲狀腺激素進(jìn)行測定并對(duì)其評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

20份血清標(biāo)本取自門診患者，均為甲狀腺疾病，血標(biāo)本無脂血和溶血。標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品均為羅氏公司提供。

1.2 儀器與試劑

電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為美國羅氏公司生產(chǎn)的2010型；美國產(chǎn)全自動(dòng)γ計(jì)數(shù)儀。電化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑購于羅氏公司，放射免疫分析試劑購于天津九鼎公司。

1.3 方法

1.3.1 精密度 用兩種方法分別對(duì)中、高值質(zhì)控品進(jìn)行測定，每份樣品連測20次，計(jì)算批內(nèi)CV值。每日測定1次，連續(xù)20次，計(jì)算批間CV值。

1.3.2 線性范圍 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol/L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）及中、高值質(zhì)控品按不同比例關(guān)系混合制成評(píng)價(jià)樣品，重復(fù)測定5次。坐標(biāo)圖上預(yù)期值與實(shí)測值的直線所達(dá)的限值即為線性范圍。

1.3.3 靈敏度 分別對(duì)空白零標(biāo)準(zhǔn)做批內(nèi)20次檢測，分別記錄放射強(qiáng)度和發(fā)光強(qiáng)度并做統(tǒng)計(jì)，再計(jì)算檢測低限（LLD）[1]。公式：LLD=均值BIK+2SBLK。

1.3.4 回收實(shí)驗(yàn) 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol／L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）作為基質(zhì)，在其中分別加入中、高值質(zhì)控品作為樣品1和2 ，然后分別進(jìn)行測定，計(jì)算均值并進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度

觀察兩種方法測定甲狀腺激素的批內(nèi)和批間CV結(jié)果可見，兩種方法均達(dá)到了臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量要求，但電化學(xué)發(fā)光法的精密度更高。見表1、2。

2.2 線性范圍

2種方法檢測FT3、FT4、TSH的可報(bào)告范圍：電化學(xué)發(fā)光免疫法（0.26～115） pmol/L、（0.12～116） pmol/L、（0.08～90）mIU/L。放射免疫法為（1.14～65）pmol/L、（1.69～82） pmol/L、（0.23～58）m/L。

2.3 靈敏度

兩種方法檢測FT3、FT4、TSH的低限，電化學(xué)發(fā)光免疫法為0.12pmol/L、0.16pmol/L、0.09mIU/L；放射免疫法為1.11pmol/L、1.77pmol/L、0.24mIU/L。

2.4 回收實(shí)驗(yàn)

檢測結(jié)果平均回收率見表。均有較好的回收率，比較后發(fā)現(xiàn)電化學(xué)發(fā)光免疫法優(yōu)于放射免疫法（P ＜ 0.05）。

3 討論

放射免疫分析始于20世紀(jì)60年代，其敏感度、特異性均較好，發(fā)生交叉反應(yīng)少，準(zhǔn)確性好、重復(fù)性好、批內(nèi)批間誤差低，但容易發(fā)生放射性污染，不能形成自動(dòng)化，不能快速地檢測、出報(bào)告[1]。電化學(xué)發(fā)光免疫法是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的新一代標(biāo)記免疫技術(shù)，近年來在國內(nèi)一部分臨床實(shí)驗(yàn)室相繼應(yīng)用。電化學(xué)發(fā)光免疫法不僅可用于檢測激素類、腫瘤標(biāo)志物類，還可用于傳染病、血藥濃度的監(jiān)測，預(yù)計(jì)將來臨床應(yīng)用會(huì)更加廣泛。電化學(xué)發(fā)光免疫法自動(dòng)化強(qiáng)，可以24小時(shí)開機(jī)，能夠隨時(shí)滿足現(xiàn)代醫(yī)院的節(jié)奏和病人對(duì)醫(yī)院的更高要求，如一些急診項(xiàng)目；絨毛膜促性腺激素、肌紅蛋白、肌鈣蛋白等，隨時(shí)檢測，具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值[2]。

本組試驗(yàn)表明兩種方法檢測血清FT3、FT4、TSH的結(jié)果在精密度、線性范圍、靈敏度、回收率等幾方面均有顯著性差異，顯示電化學(xué)發(fā)光免疫法明顯優(yōu)于放射免疫法。電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測血清FT3、FT4、TSH時(shí)，被測抗原與抗體全部參與反應(yīng)；而放射免疫法是競爭性反應(yīng)，被測物和標(biāo)準(zhǔn)物都不能全部參與反應(yīng)，最大結(jié)合時(shí)一般在50%左右，亦即抗體結(jié)合位點(diǎn)與標(biāo)記抗原結(jié)合一半[3]。試驗(yàn)結(jié)果顯示了電化學(xué)發(fā)光免疫法在可測定范圍上要遠(yuǎn)勝于放射免疫法。

電化學(xué)發(fā)光可以最大程度消除樣本底的干擾及對(duì)位量的散射，可以獲得較高的靈敏度。另外電化學(xué)發(fā)光免疫法可以全自化，能夠最大限度減少系統(tǒng)和隨機(jī)誤差。而且電化學(xué)發(fā)光免疫法試劑有效期長，檢測快速準(zhǔn)確，且安全無毒，不會(huì)出現(xiàn)同位素輻射污染的問題[4]。

因此，電化學(xué)發(fā)光將會(huì)成為微量法檢測的發(fā)展和普及方向，可以替代放免法，使實(shí)驗(yàn)室的服務(wù)具有競爭力。

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第5篇：免疫學(xué)的定義范文

[關(guān)鍵詞] 化學(xué)發(fā)光免疫測定；生化檢驗(yàn)；應(yīng)用效果；放射免疫分析法；評(píng)價(jià)

[中圖分類號(hào)] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2016）05-0113-03

化學(xué)發(fā)光免疫測定法又被稱為化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測定法，國際上通稱為chemiluminescent immunoassay，即CLIA。該方法通過磁場將抗原、抗體沉淀部分與游離部分進(jìn)行分離，從而達(dá)到定量或定性檢測的目的，廣泛應(yīng)用于臨床病毒、腫瘤標(biāo)志物、免疫系統(tǒng)疾病以及心臟疾病的診治過程。本次研究以甲狀腺腫瘤為主要研究方向，選取本院580例甲狀腺腫瘤患者，就化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫測定法與放射免疫分析法在生化檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果展開研究，并結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研與臨床經(jīng)驗(yàn)，對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫測定在其他疾病臨檢確診過程中的應(yīng)用進(jìn)行了簡要闡述，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2013年5月～2015年5月580例甲狀腺腫瘤患者，按拋硬幣法將其分為檢測組和放射組各290例，其中檢測組男142例，女148例，年齡7～85歲，平均（46.2±7.5）歲，病程1～6年，平均（3.2±1.3）年；放射組男151例，女139例，年齡9～83歲，平均（47.3±4.2）歲，病程1.5～8年，平均（4.3±1.7）年。本次研究在取得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)認(rèn)證通過的前提下進(jìn)行，所有患者均與我院簽署《調(diào)查研究知情同意書》，符合《甲狀腺病理診斷》（人民軍醫(yī)出版社，2011版）中的臨床標(biāo)準(zhǔn)，排除心腦血管疾病、特殊情況過敏、腎功能嚴(yán)重障礙以及有精神病史或家族精神病史的患者。檢測組患者性別、年齡、病程等一般資料與放射組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

將各組人員進(jìn)行編號(hào)并分別抽取3 mL靜脈血，將患者血液中加入適量肝素（Glaxo Wellcome Production，國藥準(zhǔn)字J20090006）抗凝，離心分離，3500 r/min，取血漿凍存，檢測患者甲狀腺球蛋白，檢測時(shí)間控制在4 h以內(nèi)。

放射組患者采取放射免疫法進(jìn)行檢測，使用FJ-20003/50P型γ全自動(dòng)雙探頭放射免疫計(jì)數(shù)儀（西安國營二六二廠提供）對(duì)患者甲狀腺球蛋白進(jìn)行檢測。

檢測組患者采取化學(xué)發(fā)光免疫法進(jìn)行檢測。MAGLUMI-4000型分析儀與配套化學(xué)發(fā)光試劑盒（深圳新產(chǎn)生業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司）進(jìn)行甲狀腺球蛋白檢驗(yàn)，采用雅培i2000儀器與配套試劑（美國雅培公司）進(jìn)行第三方驗(yàn)證。

1.3 觀察指標(biāo)

通過對(duì)各組甲狀腺球蛋白檢測結(jié)果進(jìn)行分析，以假陽性和假陰性檢出率為依據(jù)，對(duì)兩種檢測方法特異性和靈敏性進(jìn)行比較。放射免疫法檢測甲狀腺球蛋白正常水平為11.45～20.25 ng/mL，化學(xué)發(fā)光免疫法檢測甲狀腺球蛋白正常水平為0.73～84 ng/mL。靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100.0%，特異性=真陰性/（真陰性+假陽性）×100.0%，符合率=（真陽性+真陰性）/總例數(shù)×100.0%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

文中涉及數(shù)據(jù)均在SPSS13.0中輸入，計(jì)數(shù)資料采取率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，行t檢驗(yàn)，P

2 結(jié)果

2.1 兩組檢測結(jié)果比較

檢測組實(shí)際陽性143例，陰性147例，檢測出真陽性142例，真陰性142例。放射組實(shí)際陽性146例，陰性144例，檢測出真陽性125例，真陰性118例。采用化學(xué)發(fā)光免疫法的檢測組檢測甲狀腺球蛋白靈敏度、符合率、特異性等數(shù)據(jù)明顯高于采用放射免疫檢測法的放射組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.2 兩組甲狀腺球蛋白水平比較

檢測組甲狀腺球蛋白水平為（690.8±89.1）ng/mL，放射組為（631.2±51.3）ng/mL，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.872，P

3 討論

化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)最早應(yīng)用于20世紀(jì)70年代，當(dāng)時(shí)只作為示蹤信號(hào)，且靈敏度與發(fā)光時(shí)間明顯不足，局限了應(yīng)用領(lǐng)域。隨著醫(yī)學(xué)儀器技術(shù)發(fā)展，到80年代中期，出現(xiàn)辣根過氧化物酶標(biāo)記技術(shù)，大大提高了信號(hào)強(qiáng)度，延長了發(fā)光時(shí)間，解決了測定技術(shù)難題?；瘜W(xué)發(fā)光通常被分為3大類型：第一種為發(fā)光酶免疫測定，即LEIA；第二種為發(fā)光物免疫測定，即LIA；第三種為發(fā)光輔助因子免疫測定，即LEIA?；瘜W(xué)發(fā)光類型雖然各異，但其內(nèi)在原理卻能通用，化學(xué)發(fā)光均為通過化學(xué)發(fā)光物質(zhì)通過化學(xué)反應(yīng)從而產(chǎn)生光輻射[1]。本次研究所討論的化學(xué)發(fā)光免疫測定方法與放射免疫測定方法具有一定相似之處，二者都可以用Ag-L+CRlight進(jìn)行標(biāo)示（Ag-L代表發(fā)光物；CR代表協(xié)同反應(yīng)物）[2]。化學(xué)發(fā)光免疫測定用途十分廣范，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，化學(xué)發(fā)光免疫測定法常見于腫瘤測定過程之中，憑借其特有的光輻射，能對(duì)CA153、CA242、CEA、NES、AFP、PSA等十多種腫瘤進(jìn)行測定。

本次研究結(jié)果表明，使用化學(xué)發(fā)光免疫測定對(duì)甲狀腺球蛋白濃度進(jìn)行檢測，檢測靈敏度、符合率、特異性均明顯高于放射免疫檢測，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

此外，化學(xué)發(fā)光免疫檢測還廣泛應(yīng)用于臨床生化檢驗(yàn)中，包括病毒檢測、心臟疾病檢測等。具體內(nèi)容如：（1）梅毒螺旋體檢測。臨床常用方法為對(duì)患者體內(nèi)非密螺旋體特異性抗體進(jìn)行檢測，之后再進(jìn)行確證檢測，根據(jù)結(jié)果才能確診，常用的人工檢測方法效率低且耗時(shí)長，操作復(fù)雜，無法滿足臨床要求，在何惠[3]等的研究中，采用化學(xué)發(fā)光免疫檢測則可利用全自動(dòng)分析儀，通過兩步法進(jìn)行定性檢測，能有效降低假陽性率，提高臨床檢出準(zhǔn)確率。（2）乙肝病毒標(biāo)志物檢測。在乙型病毒性肝炎傳統(tǒng)檢測過程中多采用ELISA法進(jìn)行定性檢測，無法滿足臨床定量的需求，由于目前多以HBsAg作為病毒感染的判斷標(biāo)志物，因此可采用化學(xué)發(fā)光免疫測定法對(duì)乙肝HBsAg抗原進(jìn)行測定，達(dá)到定量與定性的雙重標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度可達(dá)100%，符合率和特異性分別可達(dá)97.61%，98.74%，且各檢測指標(biāo)均符合臨床診療需求，在較大范圍內(nèi)線性良好。（3）腫瘤標(biāo)志物檢測。腫瘤標(biāo)志物存在與細(xì)胞和組織當(dāng)中，包括蛋白質(zhì)、酶、激素等，國內(nèi)外大部分學(xué)者通過化學(xué)發(fā)光免疫測定法檢測腫瘤標(biāo)志物，對(duì)腫瘤患者早期診斷和術(shù)后檢測提供了有參考價(jià)值的指標(biāo)，例如張國軍等[4]人以化學(xué)發(fā)光免疫測定發(fā)對(duì)血清中鱗狀細(xì)胞癌抗原以及cy-fra21-1濃度進(jìn)行測定，從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)食管癌的有效診斷和病情觀察，效果良好。（4）心臟疾病檢測。陳麗珠等[5]對(duì)心臟病患者心肌損傷標(biāo)志物和肌紅蛋白間的關(guān)系進(jìn)行了數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示三者間有密切相關(guān)性，因此在心臟疾病臨檢過程中可利用化學(xué)發(fā)光免疫測定對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測，能實(shí)現(xiàn)對(duì)心臟疾病患者及時(shí)、準(zhǔn)確、有效的診斷和臨床癥狀監(jiān)護(hù)。

在臨床生化檢驗(yàn)過程中，能有效滿足疾病標(biāo)記的抗原畢竟占少數(shù)，因此還需對(duì)檢測方法進(jìn)行充分優(yōu)化，具體表現(xiàn)為：（1）有效提升分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度，提高分析結(jié)果放大倍數(shù)，延長檢驗(yàn)下限，擴(kuò)大化學(xué)發(fā)光免疫檢測的應(yīng)用范圍，使其發(fā)揮更大的臨床價(jià)值[6-9]；（2）提高分析儀器的準(zhǔn)確性，以促進(jìn)儀器小型化、智能化轉(zhuǎn)變?yōu)榘l(fā)展方向[10-12]；（3）化學(xué)發(fā)光免疫測定對(duì)發(fā)光物的生成和催化劑效果依賴較大，為有效擴(kuò)大應(yīng)用范圍，提升檢測靈敏度，還需研發(fā)出新型發(fā)光物和催化劑，同時(shí)還需修飾和增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)效果，進(jìn)一步探討新型分析方法， 提升檢驗(yàn)準(zhǔn)確性[13-18]。

綜上，化學(xué)發(fā)光免疫檢測具有較高靈敏度與準(zhǔn)確性，在臨床診斷與治療中應(yīng)用效果顯著，對(duì)準(zhǔn)確診斷出患者病情意義重大，有一定的臨床推廣價(jià)值。

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第6篇：免疫學(xué)的定義范文

【摘要】

目的: 研制人血清中促甲狀腺素（TSH）的化學(xué)發(fā)光免疫檢測試劑盒。方法: 采用辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗TSHβ亞單位特異性單克隆抗體(mAb)， 與固相包被的抗TSHα亞單位的另一mAb配對(duì)， 以魯米諾作為底物， 采用兩步法建立了雙位點(diǎn)夾心法人血清TSH的化學(xué)發(fā)光免疫定量分析法。結(jié)果: 該方法靈敏度為0.0788 mIU/L， 批內(nèi)CV平均為4.7%， 批間CV平均為8.4%， 平均回收率為93.05%。該檢測與LH、 FSH和HCG無交叉反應(yīng)。部分實(shí)驗(yàn)樣品的測試結(jié)果顯示該試劑與國外同類試劑（雅培architect i2000）的測定結(jié)果明顯相關(guān)(r＝0.984)。結(jié)論: 該方法具有較高的靈敏度、 重復(fù)性和準(zhǔn)確度， 與其他同類產(chǎn)品相比簡便、 快捷、 成本低， 適于臨床檢測和科研應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 促甲狀腺激素（TSH） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法 試劑盒

促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone， thyrotropin， TSH)是一種由垂體前葉分泌的糖蛋白激素， 由α和β2個(gè)亞基組成， 相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為28000[1]。TSH本身受下丘腦分泌的TSH釋放激素TRH的調(diào)控， TSH的主要生理作用是調(diào)節(jié)甲狀腺激素的合成與分泌， 血液中甲狀腺激素水平與腺垂體分泌TSH的量之間有負(fù)反饋抑制關(guān)系[2]。甲狀腺功能改變時(shí)， TSH的波動(dòng)較甲狀腺激素更迅速且明顯， 是反映下丘腦垂體甲狀腺軸功能的敏感指標(biāo)， 因此采用靈敏度高的TSH免疫分析法具有重要的意義?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescent immunoassay， CLIA)是一種靈敏的免疫分析方法， 在免疫診斷試劑研制中已得到了廣泛的應(yīng)用[3]。本研究根據(jù)化學(xué)發(fā)光免疫分析法的原理研制了血清TSH的檢測試劑盒， 與國內(nèi)外同類產(chǎn)品相比具有簡便、 快捷、 成本低等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 材料 TSH單克隆抗體(mAb)、 TSH標(biāo)準(zhǔn)品抗原和辣根過氧化物酶（HRP）為Sigma公司產(chǎn)品， 光免板為Thermo Electron公司產(chǎn)品， 化學(xué)發(fā)光底物為BioRad公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的配制 將TSH抗原標(biāo)定后溶于小牛血清中， 配制成含0.1， 1， 5， 20， 100 mIU/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 抗體包被板的制備 將100μL含TSH mAb（0.5mg/L）的pH9.6碳酸鹽緩沖液加至包被板中， 37℃包被2 h， 再用含10 mg/L BSA的0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液于37℃封閉2 h后晾干備用。

1.2.3 酶標(biāo)記物的制備 TSH的酶標(biāo)記物采用過碘酸鈉法制備， 然后經(jīng)0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液透析過夜后， 加入等量的甘油于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 檢測方法 將50 μL待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入包被TSH的光免板中， 37℃溫育30 min， 棄反應(yīng)液， 用洗滌液（含0.5 mg/L Tween20的0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液）洗5次， 加酶標(biāo)記物50 μL， 37℃溫育30 min后同樣用洗滌液洗5次， 然后加入發(fā)光底物于5～10 min內(nèi)測定各孔的發(fā)光值RLU。樣本中的TSH濃度依據(jù)由標(biāo)準(zhǔn)品TSH濃度和對(duì)應(yīng)的RLU建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) 在HRP魯米諾H2O2發(fā)光體系中， 將不同量的免疫復(fù)合物加入發(fā)光液中， 發(fā)光強(qiáng)度（RLU）隨反應(yīng)時(shí)間而變化。10 min后RLU接近峰值， 在5～15 min內(nèi)RLU較為穩(wěn)定， 隨后開始緩慢下降。

2.2 反應(yīng)條件優(yōu)化

2.2.1 加樣量對(duì)RLU的影響 樣本和酶標(biāo)記物的加樣量分別為50 μL和100 μL考查標(biāo)準(zhǔn)品（0、 0.1、 1、 5、 20、 100 mIU/L）RLU， 發(fā)現(xiàn)加樣量為100 μL與50 μL RLU相差不大， 說明50 μL的加樣量反應(yīng)能達(dá)到平衡(圖1)。

圖1 加樣量對(duì)RLU的影響（略）

2.2.2 反應(yīng)模式對(duì)RLU的影響 采用二步法。第一步: 加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品后， 將反應(yīng)體系在37℃分別溫育15、 30、 45、 60 min; 第二步: 加入酶標(biāo)記抗體后， 將反應(yīng)體系在37℃分別溫育15、 30、 45、 60 min。結(jié)果表明溫育時(shí)間為30 min時(shí)反應(yīng)皆能達(dá)到平衡(圖2)。

圖2 溫育時(shí)間對(duì)RLU的影響（略）

A: 第一步溫育時(shí)間對(duì)RLU的影響; B: 第二步溫育時(shí)間對(duì)RLU的影響.

2.3 穩(wěn)定性 將試劑盒放置于37℃ 6 d后， 比較與放置前參考標(biāo)準(zhǔn)品各點(diǎn)RLU值， 參考標(biāo)準(zhǔn)品各點(diǎn)RLU值未見明顯降低， 且本底發(fā)光值無明顯升高， 表明試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線無明顯漂移， 滿足穩(wěn)定性要求。

2.4 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與靈敏度 在設(shè)定的免疫反應(yīng)和發(fā)光條件下， 以標(biāo)準(zhǔn)血清的濃度（0～100 mIU/L）制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。同時(shí)測定20個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)， 用零標(biāo)準(zhǔn)均值加上2倍標(biāo)準(zhǔn)差， 計(jì)算出此方法的靈敏度為0.0788 mIU/L。

圖3 TSH標(biāo)準(zhǔn)曲線（略）

2.4.2 精密度 取低(4.44 mIU/L)、 中(19.45 mIU/L)和高(79.23 mIU/L)3種TSH濃度各重復(fù)測定10次， 測定批內(nèi)CV分別為6.2%、 3.3%和4.6%， 平均為4.7%。隔日分別進(jìn)行5次獨(dú)立試驗(yàn)， 測批間CV分別為8.3%、 7.6%和9.3%， 平均為8.4%。

2.4.3 準(zhǔn)確性 在已知TSH濃度的血清中加入3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)血清，測定加入回收率為93.05%。將TSH濃度為44.42 mIU/L的血清用標(biāo)準(zhǔn)零血清分別按1/2、 1/4、 1/8、 1/16稀釋， 測量各稀釋濃度的TSH含量， 測定稀釋回收率為99.86%。

2.4.4 特異性 在已知濃度的血清樣品中加入不同濃度的LH、 FSH和HCG后， 對(duì)TSH的測定無干擾。

2.4.5 與進(jìn)口試劑的比較 將研制的TSH CLIA定量檢測試劑盒與Abbott architect i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)共同對(duì)30例正常人、 20例甲亢及80例甲低臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測， 通過數(shù)據(jù)分析， 得出兩個(gè)檢測系統(tǒng)所得數(shù)值具有明顯相關(guān)性(圖4)。

圖4 與Abbott全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)相關(guān)性曲線（略）

3 討論

血清促甲狀腺素定量檢測的方法主要有放射免疫法、 酶聯(lián)免疫法、 時(shí)間分辨熒光免疫法和化學(xué)發(fā)光免疫法等幾種[4]?？紤]到目前化學(xué)發(fā)光和時(shí)間分辨熒光分析儀器幾乎全部為國外廠商生產(chǎn)， 而絕大多數(shù)廠商采用儀器加試劑盒捆綁銷售的壟斷模式， 并在儀器中人為設(shè)置排它性檢測程序， 從而抬高了配套試劑盒價(jià)格， 增加了檢測成本， 所以本工作旨在開發(fā)國產(chǎn)低價(jià)、 穩(wěn)定、 通用的人血TSH CLIA試劑盒。首先對(duì)讀數(shù)時(shí)間進(jìn)行了動(dòng)力學(xué)研究， 發(fā)現(xiàn)其在5～15 min內(nèi)RLU處于平臺(tái)期，反應(yīng)時(shí)間選擇10 min。其次對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)摸索， 在不同的溫育時(shí)間和加樣量的條件下， 各RLU值相差不大， 因此選擇了50 μL的加樣量與兩步共1 h的反應(yīng)時(shí)間。

我們研制的TSH化學(xué)發(fā)光免疫測定試劑盒通過方法學(xué)鑒定表明無論是靈敏度、 準(zhǔn)確性、 特異性等技術(shù)指標(biāo)均達(dá)到了臨床診斷的要求[5]; 同時(shí)該方法具有操作方便， 反應(yīng)時(shí)間短和成本低等優(yōu)點(diǎn)， 具有較廣闊的市場應(yīng)用前景。

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第7篇：免疫學(xué)的定義范文

【關(guān)鍵詞】 免疫血清

【Abstract】 AIM: To express human lrg in E.coli and to obtain an anti-Lrg immune serum. METHODS: lrg cDNA was cloned into pcTAT vector. The fusion proteins were expressed in E.coli and purified by Ni-NTA column and SDS-PAGE. Rabbits were immunized with preliminary purified Lrg protein and reinforced three times. The antiserum was collected. RESULTS: Antiserum against Lrg was obtained in immunized rabbits and its titer was more than 1∶1000 proven by ELISA and Western Blot. The purified Lrg protein could get across membranes of Papilla Dental Cells within 30 min. Immunohistochemical test with this antiserum showed that Lrg was a cytoplasmic protein and rabbit antiserum against human Lrg protein could be used in eukaryotic cell and normal tissues. CONCLUSION: The immune serum specific against Lrg is obtained， which can be used in normal tissues and cells.

【Keywords】 lrg; affinity purification; immune sera

【摘要】 目的： 在大腸桿菌表達(dá)人lrg，制備鑒定人Lrg免疫血清. 方法： 構(gòu)建pcTATlrg重組表達(dá)質(zhì)粒，并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)相應(yīng)的融合蛋白；對(duì)表達(dá)的融合蛋白采用鎳柱和SDSPAGE純化；以純化蛋白作為免疫抗原，對(duì)新西蘭白兔實(shí)施多次免疫（間隔時(shí)間分別為1 mo， 3 wk， 2 wk）. 結(jié)果： 獲得兔抗人Lrg免疫血清. 經(jīng)過ELISA和Western Blot檢測，效價(jià)在1∶1000以上. 真核細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，6HisTATLrg蛋白具有良好的穿透性，可以在30 min內(nèi)從培養(yǎng)液進(jìn)入細(xì)胞質(zhì); 免疫組化實(shí)驗(yàn)表明Lrg是一種胞質(zhì)蛋白; 兔抗人Lrg免疫血清可有效應(yīng)用于細(xì)胞和組織的檢測. 結(jié)論： 制備得到兔抗人Lrg免疫血清，為lrg的功能研究打下基礎(chǔ).

【關(guān)鍵詞】 人lrg基因；親和純化；免疫血清

0引言

人lrg基因是一種脂多糖應(yīng)答基因. 系采用基于PCR的改良消減雜交技術(shù)［1］，用脂多糖刺激人牙髓細(xì)胞， 克隆得到并登陸GenBank的新基因［2，3］， 具體功能還不清楚. 生物信息學(xué)分析表明，人lrg基因的開放讀框約558 bp， 預(yù)計(jì)編碼的蛋白質(zhì)包含186個(gè)氨基酸；編碼的序列中包含2個(gè)相互重疊的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)和1個(gè)螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)［3］， 而亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)是DNA結(jié)合蛋白的特征性結(jié)構(gòu). 因此，對(duì)人lrg基因的研究既有線索可尋，又可以采用一些較新的方法［4］，來加快研究進(jìn)度. 而深入研究Lrg在體內(nèi)組織細(xì)胞分布特點(diǎn)及其功能，需要高效價(jià)的Lrg抗體. 為此，我們?cè)诖竽c桿菌中融合表達(dá)了人Lrg蛋白， 并對(duì)6HisTATLrg初步純化. 用純化后的蛋白，免疫新西蘭大白兔， 以獲得高效價(jià)的抗Lrg血清.

1材料和方法

1.1材料

重組質(zhì)粒pUC19lrg由本室構(gòu)建［3］; BL21(DE3) 菌種和 pcTAT載體由本室保存. DNA marker DL2000購于TaKaLa 公司. PCR引物由上海博雅公司合成. 成年雄性新西蘭大白兔1只(1.2 kg)由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供. HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗購自Santa Cruz Biotechnology; DAB，NBT/BCIP 由Sigma公司提供. SABCFITC、免疫組化檢測試劑盒由武漢博士德公司提供.

1.2方法

1.2.1人lrg的擴(kuò)增和克隆PCR反應(yīng)體系中上下游引物P1，P2各20 pmol， 上游引物P1為AAGGTACCATGAAACAGCAAGAAGTACAAC，含有KpnⅠ酶切位點(diǎn); 下游引物P2為AACTCGAGCACATCAAGGAACCATCGTC，含有XhoⅠ酶切位點(diǎn). 模板pUC19lrg 0.02 μg ， 10×PCR buffer 5 μL， 10 mmol/L dNTP 1 μL， pfu polymerase 34 nkat. PCR反應(yīng)參數(shù)為95℃ 變性15 s， 56℃ 退火40 s，72℃ 延伸40 s，共30個(gè)循環(huán).

1.2.2人lrg原核表達(dá)載體的構(gòu)建利用PCR產(chǎn)物純化試劑盒對(duì)上述PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化. 純化的擴(kuò)增產(chǎn)物用KpnⅠ， XhoⅠ進(jìn)行雙酶切，pcTAT載體進(jìn)行同樣的雙酶切. 16℃連接目的基因與載體片段， 轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞， 挑克隆， 提取質(zhì)粒， 進(jìn)行KpnⅠ和XhoⅠ雙酶切鑒定.

1.2.3人Lrg融合蛋白的表達(dá)純化和免疫血清的制備pcTATlrg 轉(zhuǎn)化入BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞， 用200 mL LB(Amp+)培養(yǎng)， 1 mmol IPTG 誘導(dǎo)4 h， 收集細(xì)菌. 120 g/L SDSPAGE分析. 用Ni柱對(duì)超聲裂解誘導(dǎo)細(xì)菌上清進(jìn)行純化， 120 g/L SDSPAGE分析. 并用SDSPAGE分離純化后的融合蛋白. 將切下的目的蛋白條帶研碎，溶于生理鹽水. 采用背部皮下多點(diǎn)注射，免疫新西蘭大白兔(以下同)， 1 mo后加強(qiáng)免疫. 3 wk重新加強(qiáng)免疫. 2 wk后再強(qiáng)化1次. 于第4次加強(qiáng)免疫后7 d取兔血清.

1.2.4ELISA 檢測免疫血清的效價(jià)［5］初步純化的6HisTATLrg蛋白包被ELISA板， 間接ELISA法檢測兔抗人Lrg免疫血清的效價(jià). 一抗為1∶1000兔抗人Lrg免疫血清(對(duì)照組使用未免疫兔血清); 二抗為1∶2000 HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG ; TMB顯色，BioRad自動(dòng)酶標(biāo)儀測定.

1.2.5Western Blot 檢測免疫血清效價(jià)［6］初步純化的6HisTATLrg融合蛋白進(jìn)行SDSPAGE分離，電轉(zhuǎn)移法將相應(yīng)蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素濾膜上，用10 mL 50 g/L的脫脂奶粉封閉. 一抗為1∶1000兔抗人Lrg免疫血清(對(duì)照組使用未免疫兔血清)，二抗為1∶5000堿性磷酸標(biāo)記的羊抗兔IgG， 顯色試劑為NBT/BCIP.

1.2.6SABCFITC染色檢測免疫血清的效果爬片培養(yǎng)牙細(xì)胞，將初步純化的6HisTATLrg融合蛋白加入到培養(yǎng)液中. 30 min后取出細(xì)胞爬片， PBS洗滌， 多聚甲醛固定、正常山羊血清封閉， 分別加入1∶1000兔抗人Lrg免疫血清(對(duì)照組使用未免疫兔血清)、1∶2000生物素化的羊抗兔IgG， 熒光素染料SABCFITC， 奧林巴斯熒光顯微鏡觀察.

1.2.7免疫組化檢測免疫血清的效果對(duì)人組織進(jìn)行常規(guī)石蠟切片，用免疫組化檢測試劑盒進(jìn)行染色. 一抗為稀釋度1∶1000的兔抗人Lrg免疫血清; 二抗為1∶3000稀釋的羊抗兔IgG. 未免疫兔血清作為陰性對(duì)照. DAB顯色，常規(guī)脫水，透明，中性樹脂封片.

2結(jié)果

2.1人lrg的擴(kuò)增和克隆以pUC19lrg為模板，利用設(shè)計(jì)的引物PCR擴(kuò)增lrg基因. 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析，可見約1000 bp目的條帶（Fig 1），與預(yù)期大小相符.

2.2人lrg原核表達(dá)載體的構(gòu)建融合表達(dá)載體pcTATlrg進(jìn)行KpnⅠ和XhoⅠ酶切鑒定. 酶切產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳分析，可見約1000 bp的目的條帶（Fig 2），與預(yù)期大小相符.

2.3人Lrg融合蛋白的表達(dá)純化和免疫血清制備經(jīng)IPTG誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化pcTATlrg細(xì)菌表現(xiàn)目的蛋白Mr 為25×103，占菌體蛋白總量的42%（Fig 3）. 經(jīng)Ni柱純化上清蛋白后，該目的蛋白占菌體蛋白總量的46%（Fig 3）. 將Ni柱純化后的蛋白進(jìn)行SDSPAGE二次純化（Fig 4），切下相應(yīng)的目的蛋白條帶，生理鹽水溶解，免疫新西蘭白兔.

2.4ELISA檢測免疫血清的效價(jià)酶標(biāo)儀測量A280 nm值(平均數(shù))為: 空白孔0.035， 1∶1000抗體孔0.177. 二者之比大于5，參考試劑盒規(guī)定，表明免疫新西蘭大白兔所產(chǎn)生的免疫血清效價(jià)在1∶1000以上.

2.5Westernblot 檢測免疫血清效價(jià)誘導(dǎo)后的細(xì)菌有預(yù)期大小 (Mr為25×103) 的特異性條帶(Fig 5)， 同時(shí)未免疫兔血清沒有表達(dá)相應(yīng)的蛋白條帶.

2.6SABCFITC染色檢測免疫血清效果與對(duì)照組(Fig 6A)相比，加入6HisTATLrg融合蛋白的牙細(xì)胞在胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)明顯的綠色熒光(Fig 6B) . 表明6HisTATLrg融合蛋白在30 min內(nèi)進(jìn)入細(xì)胞，而本實(shí)驗(yàn)制備的免疫血清可有效應(yīng)用于真核細(xì)胞的檢測.

2.7免疫組化進(jìn)行免疫血清的檢測加未免疫兔血清的間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)呈藍(lán)色 (Fig 7A) ；加兔抗人Lrg免疫血清的間質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色免疫反應(yīng)陽性顆粒(Fig 7B). 說明Lrg蛋白位于正常組織間質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi).

3討論

近年來內(nèi)毒素血癥的研究在危重醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中十分活躍，對(duì)其發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)也在不斷深入. 脂多糖（LPS）是一種內(nèi)毒素，大量實(shí)驗(yàn)表明，LPS、脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)和脂多糖受體系統(tǒng)(CD14)參與了炎癥反應(yīng)的病理生理過程［7］. LPS在細(xì)胞表面以LPSLBPCD14三體復(fù)合物的形式活化TLR4信號(hào)傳導(dǎo)途徑，通過一系列胞內(nèi)分子的相互作用，產(chǎn)生炎性因子（如IL1，TNF等），導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，甚至出現(xiàn)DIC和MOD［8］. LPS是機(jī)體炎癥反應(yīng)的重要觸發(fā)劑， 因此，探討LPS刺激后應(yīng)答基因的功能，尤其是新發(fā)現(xiàn)基因的功能，研究其在LPS信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的作用部位和作用性質(zhì)，有助于闡明炎癥發(fā)生的分子機(jī)制.

我們課題組自從成功克隆lrg基因并登錄GenBank［1，3］以來，對(duì)該基因的功能展開了初步研究. 生物信息學(xué)分析表明，lrg基因編碼的蛋白可能是一種DNA結(jié)合蛋白. 本課題組的前期實(shí)驗(yàn)表明，lrg基因作為一種LPS應(yīng)答基因，會(huì)對(duì)真核細(xì)胞的細(xì)胞周期發(fā)生一定影響（資料待發(fā)表）. 盡管實(shí)驗(yàn)取得了一定進(jìn)展，但該基因更多功能尚有待闡明. 利用課題組設(shè)計(jì)的引物，PCR得到了長1000 bp的產(chǎn)物，與預(yù)期大小相符. 該片段不僅包括了lrg基因的編碼區(qū)，也包括了lrg基因下游的非編碼區(qū)序列. 為了進(jìn)一步研究lrg基因的功能，需獲得針對(duì)Lrg蛋白的特異性抗體，本室采用初步純化后的6HisTATLrg融合蛋白免疫新西蘭大白兔，獲得了兔抗人免疫血清. ELISA和Western Blot檢測表明，其效價(jià)在1∶1000以上; 并且具有比較高的特異性.

我們采用的原核表達(dá)載體是pcTAT. 該載體采用T7啟動(dòng)子，帶有6His的純化標(biāo)簽以及HIVTAT部分基因序列. HIVTAT的部分基因序列編碼11個(gè)氨基酸，可以快速穿過所有哺乳動(dòng)物的細(xì)胞膜［9-11］；6His基因編碼6個(gè)氨基酸. 本實(shí)驗(yàn)成功地將Lrg蛋白與6His純化標(biāo)簽以及HIVTAT蛋白的基因進(jìn)行了重組，獲得了6HisTATLrg融合蛋白的基因. 重組基因編碼的融合蛋白含216個(gè)氨基酸. 預(yù)計(jì)該蛋白Mr 為（20～26）×103. SDSPAGE表明，本研究表達(dá)的融合蛋白與預(yù)期大小相符. 通過蛋白融合，6HisTATLrg同樣獲得了快速穿膜特性，可在30 min內(nèi)迅速從培養(yǎng)液穿過細(xì)胞膜到達(dá)牙細(xì)胞的胞質(zhì). 這種快速穿膜特性對(duì)于研究該基因在真核細(xì)胞內(nèi)的功能具有非常重要的意義. 我們采用NiNTA純化系統(tǒng)［12］，專門用于純化含有6His標(biāo)簽的重組蛋白，具有較高的純化效率，初步純化了Lrg蛋白. 初步實(shí)驗(yàn)表明，我們獲得的純化蛋白和免疫血清，純度和產(chǎn)量足以應(yīng)用于lrg的組織分布和功能研究. SABCFITC實(shí)驗(yàn)表明，在牙細(xì)胞中，加入的Lrg蛋白在胞質(zhì)中均勻分布. 而上述結(jié)果與免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示的Lrg在組織的分布結(jié)果一致，從而驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性.

【參考文獻(xiàn)】

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第8篇：免疫學(xué)的定義范文

在中醫(yī)院校，《微生物與免疫學(xué)》是一門西醫(yī)基礎(chǔ)課程，必修考查，不易引起學(xué)生重視。但隨著近年來SARS病毒、禽流感病毒等新病原微生物的出現(xiàn)，《微生物與免疫學(xué)》課程日益受到重視。本門課程與中醫(yī)有密切的聯(lián)系，如“正氣與免疫功能”、“脾虛與免疫”；溫病的發(fā)病原因與病原微生物，如“春溫與腦膜炎球菌”、“夏溫與乙腦病毒”、“濕溫與傷寒、副傷寒桿菌”、“疫疹與斑疹傷寒立克次體”、“爛喉痧與猩紅熱”、“霍亂與霍亂弧菌”等，已經(jīng)成為中西醫(yī)結(jié)合的橋梁紐帶之一。學(xué)好本門課程對(duì)于中醫(yī)院校學(xué)生吸收現(xiàn)代醫(yī)學(xué)成果、繼承發(fā)揚(yáng)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)具有重要意義，而教學(xué)方法的合理運(yùn)用可以明顯提高教學(xué)效果。

1 啟發(fā)式教學(xué)的運(yùn)用

啟發(fā)式教學(xué)可以使課堂變得雙向互動(dòng)，激發(fā)學(xué)生的積極性。如“消毒與滅菌”，先讓學(xué)生回憶“非典時(shí)期”的常見現(xiàn)象：帶口罩、噴藥、通風(fēng)、空氣過濾器等，然后引出消毒滅菌的目的和意義，使生活與理論有機(jī)結(jié)合起來，達(dá)到活學(xué)活用的目的。另外，啟發(fā)式教學(xué)能夠引導(dǎo)學(xué)生利用有限的實(shí)驗(yàn)課時(shí)學(xué)到更多的知識(shí)，如中藥抗微生物實(shí)驗(yàn)，同樣的操作而結(jié)果不同，引出影響中藥抗微生物效果的因素。那么，如何使結(jié)果具有可重復(fù)性？讓學(xué)生自己思考，尋找答案，充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣和積極性。

免疫學(xué)理論性強(qiáng)，內(nèi)容抽象深?yuàn)W，利用啟發(fā)式教學(xué)，可以由淺入深，培養(yǎng)學(xué)生思考能力和邏輯思維能力。當(dāng)介紹免疫的定義時(shí)，比較抽象，學(xué)生一般會(huì)望文生義。為了打破慣性思維，從現(xiàn)實(shí)中接種疫苗和過敏現(xiàn)象切入，通過討論思考，使學(xué)生掌握免疫的利弊，對(duì)免疫的概念有全面的理解。

2 重視現(xiàn)代化教學(xué)手段

充分利用各種現(xiàn)代技術(shù)手段，是提高教學(xué)質(zhì)量的捷徑。《微生物與免疫學(xué)》內(nèi)容豐富，學(xué)科發(fā)展十分迅速，在有限的課時(shí)內(nèi)形象生動(dòng)地將前沿內(nèi)容介紹給學(xué)生，提高課堂教和學(xué)的水平，多媒體教學(xué)可以達(dá)到事半功倍的效果。

首先，建立電子化教案和講稿。有利于提高備課的效率和質(zhì)量，有利于在教學(xué)中隨時(shí)根據(jù)實(shí)際需要增、減和更新授課內(nèi)容，把教師從重復(fù)的教案抄寫中解放出來，從而把更多的精力投入教學(xué)改革和科研，不斷提高教學(xué)質(zhì)量。其次，建立豐富多彩的資料庫。通過互聯(lián)網(wǎng)尋找國內(nèi)外豐富多彩的數(shù)碼資料，利用數(shù)碼相機(jī)從其它教材、雜志、生活中收集生動(dòng)的圖片，使生活與學(xué)習(xí)有機(jī)結(jié)合起來，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。最后，結(jié)合傳統(tǒng)的板書教學(xué)，對(duì)章節(jié)內(nèi)容提綱挈領(lǐng)板書，結(jié)合幻燈片講解，使學(xué)生能夠整體把握重點(diǎn)，形成完整的知識(shí)結(jié)構(gòu)。

3 合理調(diào)整授課內(nèi)容順序

在中醫(yī)院校，《微生物與免疫學(xué)》課時(shí)少，為了使內(nèi)容由淺入深，傳統(tǒng)的教學(xué)順序是先講授微生物學(xué)概論，然后插入免疫學(xué)基礎(chǔ)，但結(jié)果并不理想。由于大多數(shù)學(xué)生對(duì)考查科目沒有有效的預(yù)習(xí)和復(fù)習(xí)，往往在學(xué)完免疫學(xué)基礎(chǔ)后忘記了微生物學(xué)的基本原理；而且，有些學(xué)生還將免疫誤解為是由于微生物感染所引起的。所以，我們吸收了西醫(yī)院校的教學(xué)順序，即先講授免疫學(xué)部分后講微生物學(xué)部分，使復(fù)雜的內(nèi)容條理化，使初學(xué)者易于理解錯(cuò)綜復(fù)雜的抽象概念，易于理清思路、提綱挈領(lǐng)地進(jìn)行學(xué)習(xí)，學(xué)生對(duì)免疫學(xué)知識(shí)的理解度和總體優(yōu)秀率有明顯的提高。當(dāng)然，先講授免疫學(xué)，對(duì)于學(xué)生而言入門較為困難，但只要在授課時(shí)不斷強(qiáng)化免疫學(xué)的相關(guān)內(nèi)容，能夠達(dá)到較好的教學(xué)效果。

4 移情在教學(xué)過程中的運(yùn)用

教育學(xué)中的移情(Empathy)是指教師設(shè)身處地從學(xué)生的角度，用學(xué)生的眼光審視教學(xué)；在與學(xué)生的交往中，體會(huì)他們的所思所行，體察他們的各種需求和感情；根據(jù)教學(xué)的目標(biāo)和要求，及時(shí)妥善地調(diào)整改進(jìn)教學(xué)，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)和探索的內(nèi)在動(dòng)力，從而提高教與學(xué)的效果?！段⑸锱c免疫學(xué)》所講授的內(nèi)容大多是看不見摸不著的，需要學(xué)生具有豐富的想象力，把一些看不見摸不著的概念放大、具體化。如把經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)引入教學(xué)內(nèi)容，讓學(xué)生體會(huì)到知識(shí)產(chǎn)生的過程，了解科學(xué)研究的艱辛和智慧；利用課間時(shí)間，交流教與學(xué)的心得，及時(shí)了解學(xué)生聽課的體會(huì)和對(duì)所學(xué)知識(shí)的掌握程度，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情和感情回饋。教師和學(xué)生在教學(xué)中的心理和角色是不同的，但在理智和情感上是平等的個(gè)體，教師通過移情，可以拉近師生的心理差距，形成良性互動(dòng)，有利于提高教與學(xué)的水平和質(zhì)量。

5 運(yùn)用行之有效的考查方法

考查是督促學(xué)生掌握所學(xué)課程的基礎(chǔ)理論、基本技能和分析解決問題能力的重要手段，也是反映教學(xué)質(zhì)量的重要方法。采用定性與定量相結(jié)合的評(píng)價(jià)方式對(duì)學(xué)生進(jìn)行測評(píng)，實(shí)施過程評(píng)價(jià)與終結(jié)評(píng)價(jià)相結(jié)合，針對(duì)不同的專業(yè)和層次設(shè)計(jì)不同的考查方法，重點(diǎn)考察學(xué)生掌握基本知識(shí)、運(yùn)用知識(shí)分析問題和解決問題的能力。我們目前的考查方式是：理論閉卷考試成績占70%，實(shí)驗(yàn)部分占20%，平時(shí)的作業(yè)和課堂發(fā)言占10%。

當(dāng)然，也會(huì)根據(jù)實(shí)際情況選擇考查方式，只要能夠客觀評(píng)價(jià)一個(gè)學(xué)生對(duì)所學(xué)知識(shí)的掌握和綜合運(yùn)用情況，可以根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握運(yùn)用。

第9篇：免疫學(xué)的定義范文

一、提問舊知，引入新課

教師在課前首先提問上節(jié)課的知識(shí)，“動(dòng)物細(xì)胞融合的過程是什么？動(dòng)物細(xì)胞融合過程中融合劑是什么？動(dòng)物細(xì)胞融合的優(yōu)點(diǎn)是什么？”學(xué)生回答后，教師總結(jié)，動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的應(yīng)用就是制備單克隆抗體，從而引出本節(jié)課的教學(xué)內(nèi)容――單克隆抗體的制備。

二、講授新課

1.分析題目

教師首先引導(dǎo)學(xué)生分析題目，找到熟悉的詞語，如“抗體”“克隆”，引導(dǎo)學(xué)生回憶關(guān)于抗體的知識(shí)，主要有三方面：（1）抗體的定義；（2）產(chǎn)生抗體的細(xì)胞；（3）抗體的作用。在此基礎(chǔ)上，引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)“單克隆”的含義，進(jìn)而總結(jié)出單克隆抗體的定義，接著引導(dǎo)學(xué)生找出定義中的關(guān)鍵詞，加深對(duì)定義的理解。

2.單克隆抗體的制備過程