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關(guān)鍵詞：血細(xì)胞分析儀 檢定 問(wèn)題
血細(xì)胞分析儀是廣泛應(yīng)用于醫(yī)療領(lǐng)域的血液檢測(cè)儀器，能檢測(cè)出血液參數(shù)中紅白細(xì)胞總數(shù)、血小板和血紅蛋白等多種血液項(xiàng)目，所檢驗(yàn)出來(lái)的參數(shù)能為醫(yī)生診斷和治療患者提供有效依據(jù)。目前來(lái)看，紅細(xì)胞分析儀已經(jīng)不僅僅局限于人和動(dòng)物的血液檢驗(yàn)，已應(yīng)用于腹腔腦脊髓細(xì)胞計(jì)算和分類(lèi)中。雖然隨著科學(xué)技術(shù)不斷的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀功能逐漸增多、應(yīng)用范圍拓展，但是在其實(shí)際應(yīng)用中常會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題，為了保證血細(xì)胞分析儀質(zhì)量，相應(yīng)計(jì)量檢定部門(mén)需要對(duì)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行定期計(jì)量檢定，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題予以解決。下文對(duì)血細(xì)胞分析儀檢定相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行分析。
一、檢定規(guī)程不完善
科學(xué)技術(shù)不斷的發(fā)展，使血細(xì)胞分析儀的種類(lèi)和功能逐漸增多，分析儀分析的參數(shù)也隨之增多，醫(yī)生對(duì)血細(xì)胞分析儀的依賴(lài)性也越來(lái)越大。而血細(xì)胞分析儀分析的參數(shù)必須準(zhǔn)確，才能為醫(yī)生提供有效參考依據(jù)。這就需要適時(shí)地對(duì)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢定，檢定過(guò)程中一般會(huì)依據(jù)分析儀計(jì)量檢定規(guī)程，現(xiàn)有的規(guī)程中對(duì)分析儀檢定參數(shù)的規(guī)定只有幾項(xiàng)，然而目前很多醫(yī)院臨床中采用的多是兩分類(lèi)、三分類(lèi)和五分類(lèi)的血細(xì)胞分析儀，其中五分類(lèi)的血細(xì)胞分析儀檢驗(yàn)參數(shù)已多達(dá)數(shù)十種，這就使得檢定人員因無(wú)血細(xì)胞分析儀檢定依據(jù)，不能更好的對(duì)白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血紅蛋白以外的參數(shù)進(jìn)行計(jì)量檢定。
此外，血細(xì)胞分析儀計(jì)量檢定規(guī)定中的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也不能更好滿足分析儀校準(zhǔn)需求。相關(guān)人士在用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)兩分類(lèi)和三分類(lèi)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢定時(shí)，發(fā)現(xiàn)被檢定的血細(xì)胞分析儀無(wú)法識(shí)別計(jì)量檢定規(guī)定中的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用過(guò)程中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是無(wú)效的。后來(lái)經(jīng)過(guò)經(jīng)驗(yàn)豐富的檢定專(zhuān)家和檢定人員反復(fù)測(cè)試后，得出不同血細(xì)胞分析儀只有選擇適應(yīng)性好的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行計(jì)量檢定，才能更好的發(fā)揮作用。因此，血細(xì)胞分析儀檢定規(guī)程必須完善，為分析儀檢定工作提供有效依據(jù)，保證分析儀參數(shù)準(zhǔn)確性。
二、分析儀檢測(cè)技術(shù)問(wèn)題
血細(xì)胞分析儀主要是由機(jī)械系統(tǒng)、電學(xué)系統(tǒng)、細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)構(gòu)成的，其中細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)技術(shù)結(jié)果影響最大，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)采用的技術(shù)以電阻抗檢測(cè)技術(shù)和光散檢測(cè)技術(shù)為主。電阻抗檢測(cè)技術(shù)就是在稀釋液中設(shè)置一個(gè)微孔，在微孔兩端各加適量的電極，再將稀釋后的負(fù)壓加向微孔小管中，這樣就可以通過(guò)電極電阻變化產(chǎn)生的電脈沖信號(hào)，進(jìn)行顆粒計(jì)數(shù)，再經(jīng)過(guò)甄別、選擇和計(jì)數(shù)得到相應(yīng)檢測(cè)數(shù)據(jù)。但是這種檢測(cè)技術(shù)因無(wú)法辨別白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，不能準(zhǔn)確的進(jìn)行計(jì)數(shù)或得出準(zhǔn)確參數(shù)數(shù)據(jù)；光散射技術(shù)是血液稀釋后變成極細(xì)液流穿過(guò)激光束，使細(xì)胞被激光照射從而形成散射被光電倍增接收，這時(shí)利用細(xì)胞散射脈沖信號(hào)識(shí)別、甄選細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)計(jì)算機(jī)得出細(xì)胞數(shù)量參數(shù)。這種技術(shù)雖然能彌補(bǔ)電阻抗檢測(cè)技術(shù)的劣勢(shì)，但是因價(jià)格高而未被廣泛使用。
三、血細(xì)胞溫度問(wèn)題
血細(xì)胞分析儀作為溫度適應(yīng)性較為敏感的儀器，受溫度環(huán)境影響明顯，即便在參數(shù)一定情況下，溫度變化也會(huì)影響血細(xì)胞檢測(cè)數(shù)據(jù)值。尤其是冬季和夏季對(duì)一些條件相對(duì)較差醫(yī)院的血細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢定時(shí)，因溫度與血細(xì)胞儀適應(yīng)的溫度不相符，使得常用的全血質(zhì)控物無(wú)法更好的對(duì)分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，從而影響血細(xì)胞分析儀參數(shù)的準(zhǔn)確性?；诖藢?duì)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行定期檢定十分重要，雖然一些條件相對(duì)較好的醫(yī)院用全血質(zhì)控物對(duì)分析儀進(jìn)行定期檢定和校準(zhǔn)，但是畢竟少數(shù)，還有一部分醫(yī)院沒(méi)有條件或沒(méi)有用全血質(zhì)控物對(duì)分析儀進(jìn)行檢定，這一定程度上會(huì)使分析儀檢驗(yàn)參數(shù)不準(zhǔn)確，無(wú)法為醫(yī)生診斷和治療提供有效數(shù)據(jù)。
四、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)問(wèn)題
血細(xì)胞檢測(cè)儀檢定前需要選擇紅細(xì)胞和包細(xì)胞微粒作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對(duì)紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行檢定。因兩種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢定是以電阻法為依據(jù)進(jìn)行的，其檢驗(yàn)結(jié)果計(jì)數(shù)為零，不能確保紅細(xì)胞和白細(xì)胞檢測(cè)數(shù)據(jù)質(zhì)量。全血標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為特殊的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，具備紅細(xì)胞和白細(xì)胞通用性質(zhì)，而這種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在出倉(cāng)、運(yùn)輸、保存過(guò)程中容易出現(xiàn)不按計(jì)量規(guī)定執(zhí)行問(wèn)題，使標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)受到損傷，從而使檢定結(jié)果無(wú)法達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。具體來(lái)說(shuō)，運(yùn)輸中車(chē)輛會(huì)產(chǎn)生震動(dòng)，使紅細(xì)胞受到擠壓、變形或破裂使出血紅蛋白被釋放。再加上運(yùn)輸過(guò)程中對(duì)保存條件有嚴(yán)格要求，溫度在2～8℃之間且存放于血箱之中，使用冰袋兩天之內(nèi)必須保證溫度在10℃以下，一旦溫度過(guò)高，就會(huì)使紅細(xì)胞出現(xiàn)溶血現(xiàn)象；采購(gòu)出來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使需要放入冷藏箱儲(chǔ)存的，如果儲(chǔ)存過(guò)程中出現(xiàn)停電事故或頻繁的開(kāi)啟冰箱，會(huì)破壞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)環(huán)境使紅細(xì)胞中的血紅蛋被釋放。保準(zhǔn)物質(zhì)保存時(shí)間也不應(yīng)該過(guò)長(zhǎng)，過(guò)長(zhǎng)容易出現(xiàn)自溶、體積變小或使血小板發(fā)生變化，影響計(jì)數(shù)結(jié)果；血細(xì)胞分析儀標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用前也有嚴(yán)格規(guī)定，必須在標(biāo)準(zhǔn)溫度下?lián)u勻，以便得到好的重復(fù)性。如果不在標(biāo)準(zhǔn)溫度下來(lái)?yè)u勻標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，會(huì)影響標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
五、操作問(wèn)題
血細(xì)胞分析儀檢定過(guò)程中有全血模式和預(yù)稀釋模式兩種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可供選擇，從前人的實(shí)踐結(jié)果可知全血模式的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)較稀釋模式重復(fù)性低，其與測(cè)定時(shí)稀釋液和樣品量準(zhǔn)確性有直接關(guān)系，這兩種模式之間除對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行檢驗(yàn)外，其他結(jié)果幾乎無(wú)共性。在對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)前，必須保證血細(xì)胞分析儀細(xì)胞計(jì)數(shù)和規(guī)程一致，如果血細(xì)胞分析儀之前進(jìn)行過(guò)臨床檢驗(yàn)，清洗幾次就能達(dá)到要求。如果使用時(shí)血小板計(jì)數(shù)超過(guò)150×109/L時(shí)，需要對(duì)儀器接頭、地線進(jìn)行檢查，看其是否出現(xiàn)問(wèn)題，以免因上述問(wèn)題使血小板受到干擾。為了確保分析儀質(zhì)量，除了清洗儀器和安裝地線外，還應(yīng)該保證血小板基數(shù)不大于2，以保證血細(xì)胞分析儀繼續(xù)工作。血細(xì)胞分析儀周?chē)h(huán)境對(duì)血細(xì)胞分析測(cè)量也有直接影響，其中灰塵對(duì)血小板的影響最大，若檢測(cè)中把灰塵當(dāng)作血小板會(huì)使檢測(cè)計(jì)數(shù)偏高，從而影響血細(xì)胞分析儀檢測(cè)數(shù)據(jù)真實(shí)性。此外，血細(xì)胞分析儀周?chē)碾妷骸⒃胍?、高?qiáng)度磁場(chǎng)等會(huì)成為分析儀干擾源，使血細(xì)胞分析儀不能順利進(jìn)行檢測(cè)工作。
結(jié)束語(yǔ)：
血細(xì)胞分析檢定工作中一般會(huì)因檢定規(guī)程不完善問(wèn)題、技術(shù)問(wèn)題、溫度問(wèn)題、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)問(wèn)題和操作問(wèn)題的影響，而使血細(xì)胞分析儀檢定工作無(wú)法順利開(kāi)展，分析儀數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性無(wú)法得到保證?；诖?，國(guó)家行政部門(mén)應(yīng)該從實(shí)際出發(fā)對(duì)血細(xì)胞分析儀計(jì)量檢定規(guī)程進(jìn)行完善，檢定專(zhuān)業(yè)人員應(yīng)不斷的研究分析儀檢定新技術(shù)、注意血細(xì)胞分析儀操作流程和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理工作，以確保血細(xì)胞分析檢定工作有序進(jìn)行。同時(shí)醫(yī)院也應(yīng)該合理的制定血細(xì)胞分析儀檢定計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)，適時(shí)地對(duì)分析儀進(jìn)行周期性檢定，以減少血細(xì)胞分析儀參數(shù)不穩(wěn)定性，保證人們生命健康。
參考文獻(xiàn)：
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【關(guān)鍵詞】血細(xì)胞分析儀;比對(duì)試驗(yàn);檢測(cè)系統(tǒng)
【中圖分類(lèi)號(hào)】R446.77 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1008-6455(2010)08-0218-01
血細(xì)胞分析是臨床最常用的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo),其結(jié)果的準(zhǔn)確與否直接影響到多種疾病的診療。全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀由于計(jì)數(shù)準(zhǔn)確,精密度高,操作簡(jiǎn)便、快速,因而發(fā)展迅速,已逐漸取代傳統(tǒng)手工方法,成為臨床實(shí)驗(yàn)室的主要檢測(cè)手段。但由于生產(chǎn)血細(xì)胞分析儀的廠家多,各自使用的測(cè)定原理和方法不盡相同,導(dǎo)致其測(cè)定結(jié)果及參考范圍有所差異。各醫(yī)院使用不同廠家和型號(hào)的血細(xì)胞分析儀已成為普遍現(xiàn)象,致使分析結(jié)果呈現(xiàn)不同程度的差異,給臨床跟蹤觀察與對(duì)比帶來(lái)困難[1]。
根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的規(guī)定,掌握本室內(nèi)機(jī)臺(tái)血細(xì)胞分析儀結(jié)果的可比性和可靠性,保證本室內(nèi)檢測(cè)結(jié)果的一致性。本文對(duì)本室內(nèi)的兩臺(tái)(貝克曼庫(kù)爾特 HL-750和SysmexXH-2100)不同廠家.不同型號(hào)的血細(xì)胞分析儀的結(jié)果進(jìn)行了比對(duì),兩臺(tái)血細(xì)胞分析儀性能穩(wěn)定,使用配套的校準(zhǔn)品.質(zhì)控品和試。每日有室內(nèi)質(zhì)控血球檢測(cè),對(duì)兩臺(tái)血細(xì)胞分析儀測(cè)定的WBC.RBC.Hb.HCT.PLT結(jié)果進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn),結(jié)果報(bào)道如下:
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 儀器:血細(xì)胞分析儀兩臺(tái),分別是貝克曼庫(kù)爾特公司的HL-750血細(xì)胞分析儀和Sysmex公司的XH-2100血細(xì)胞分析儀。
1.1.2 主要試劑:HL-750血細(xì)胞分析儀試劑.校準(zhǔn)品.質(zhì)控品由美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司提供;XH-2100血細(xì)胞分析儀試劑.校準(zhǔn)品.質(zhì)控品由希思美康公司提供的Sysmex產(chǎn)品。
1.1.3 標(biāo)本:臨床患者新鮮靜脈抗凝血?？鼓齽镋DTA-k2,采血管為奧地利格雷娜公司的真空采血管。
1.2 方法
1.2.1 室內(nèi)質(zhì)控:各臺(tái)血細(xì)胞分析儀每天用全血質(zhì)控物測(cè)定,其中包括WBC、RBC、Hb、HCT、PLT、MCV結(jié)果為室內(nèi)質(zhì)控項(xiàng)目,結(jié)果在控制允許范圍內(nèi)。
1.2.2 比對(duì)實(shí)驗(yàn):采取患者新鮮靜脈血標(biāo)本,每日選取10例,其中包括高.中.低值血細(xì)胞標(biāo)本,分別進(jìn)行WBC、RBC、Hb、HCT、PLT、MCV檢測(cè),重復(fù)測(cè)定2次,取平均值,供測(cè)定5天,實(shí)驗(yàn)在2小時(shí)內(nèi)完成。
1.2.3 數(shù)據(jù)處理:各種數(shù)據(jù)使用MicrosoftExcel 工具中函數(shù)計(jì)算;方法:在Excel 方格中分別輸入兩臺(tái)血細(xì)胞分析儀的WBC、RBC、Hb、HCT、PLT、MCV 數(shù)據(jù),計(jì)算兩組數(shù)據(jù)的CV值,相關(guān)系數(shù).回歸方程。
2 結(jié)果
2.1 2臺(tái)血細(xì)胞分析儀每日室內(nèi)質(zhì)控,共計(jì)測(cè)定30天,CV值見(jiàn)表1。
3 討論
血細(xì)胞分析儀因?yàn)橛?jì)數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確、精度高,操作簡(jiǎn)便、快速,因而發(fā)展迅速,成為臨床實(shí)驗(yàn)室地主要檢測(cè)手段。在國(guó)內(nèi)大中型醫(yī)院,同一實(shí)驗(yàn)室使用不同廠家和型號(hào)的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀已成為較普遍現(xiàn)象,即使各儀器配套質(zhì)控物都在允許范圍內(nèi),也會(huì)出現(xiàn)同一標(biāo)本用不同地儀器分析,出現(xiàn)測(cè)定值的差異,給評(píng)估和解釋結(jié)果帶來(lái)一定困難,并不時(shí)地給疾病地診斷、治療及預(yù)后帶來(lái)誤解和不良地影響,又增加了經(jīng)濟(jì)成本[2]。
通過(guò)新鮮全血對(duì)2臺(tái)儀器測(cè)定結(jié)果比對(duì)表明:2臺(tái)儀器地相關(guān)性較好,尤其WBC、RBC、HGB、3個(gè)項(xiàng)目結(jié)果相關(guān)密切(r均>0.975),結(jié)果間沒(méi)有明顯差異,PLT結(jié)果相關(guān)性也很好,NCCLS推薦地多臺(tái)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)PLT地CV值可為25%。其中C-5d,C-2d和CD-1700,3臺(tái)儀器相關(guān)性好,BC-3000略差一些。結(jié)果間地比對(duì)是了解儀器之間測(cè)定結(jié)果地可比性和可靠性,保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果地一致性。以上結(jié)果表明:4臺(tái)血細(xì)胞分析儀具有很好地可比性,可用新鮮全血替代配套質(zhì)控物每天對(duì)4臺(tái)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行質(zhì)控。
各臺(tái)血液分析儀各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的結(jié)果穩(wěn)定、精密度好,CV值均
參考文獻(xiàn)
[1] 彭明婷,谷小林,等.不同方法校準(zhǔn)血液分析儀結(jié)果比較.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2000,23(1):35-37
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1材料與方法
1．1方法
1．1．1儀器精密度測(cè)定取正常EDTA-K2抗凝新鮮全血一份，分別在每一臺(tái)儀器上連續(xù)重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算RBC、WBC、HGB、HCT、PLT的均值、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)、變異系數(shù)(CV)。
1．1．2比對(duì)試驗(yàn)以CD-3700血細(xì)胞分析儀為參考比對(duì)儀器(X)。每日檢測(cè)8份血清標(biāo)本，將新鮮抗凝全血標(biāo)本按18，81的順序分別在三臺(tái)血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行連續(xù)測(cè)定，2h內(nèi)完成。連續(xù)測(cè)定5d，記錄檢測(cè)結(jié)果。
1．2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用MicrosoftExcel2003和SPSS16．0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并給出線性回歸方程Y=bX+a。精密度評(píng)價(jià)根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)方案(CLIA＇88)允許誤差的1/4作為允許誤差，各比對(duì)項(xiàng)目的CV值必須滿足:RBC≤1．5%、WBC≤3．5%、HGB≤1．75%、HCT≤1．5%、PLT≤6．25%。以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)方案(CLIA''''88)能力比對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量要求范圍的1/2作為各項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的允許誤差:RBC≤3．0%、WBC≤7．0%、HGB≤3．5%、HCT≤3．0%、PLT≤12．5%［3］。
2結(jié)果
2．1精密度評(píng)價(jià)RBC、WBC、HGB、HCT、PLT五個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目在三臺(tái)血細(xì)胞分析儀上精密度均符合要求。見(jiàn)表1。
2．2相關(guān)性和回歸分析試驗(yàn)儀器(Y)與比對(duì)儀器(X)測(cè)定結(jié)果相關(guān)性見(jiàn)表2。
2．3偏倚評(píng)估將各檢測(cè)項(xiàng)目的靶值代入相應(yīng)的回歸方程，計(jì)算比較方法與試驗(yàn)方法測(cè)定結(jié)果的預(yù)期偏倚和相對(duì)偏倚，以CLIA''''88能力比對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量要求范圍的1/2為臨床可接受性能的判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見(jiàn)表3。
3討論
隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，越來(lái)越多的臨床實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)不同檢測(cè)儀器，構(gòu)建多種檢測(cè)系統(tǒng)，以提高患者標(biāo)本的檢測(cè)速度。臨床實(shí)驗(yàn)室內(nèi)同時(shí)擁有2種或2種以上相同或不同的檢測(cè)系統(tǒng)已經(jīng)十分普遍。為確保不同儀器檢測(cè)同一檢測(cè)項(xiàng)目的結(jié)果具有一致性，CAP認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)中要求，試驗(yàn)室每年需要進(jìn)行至少2次儀器比對(duì)［4］。另外，考慮到實(shí)驗(yàn)成本的因素，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每年參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的儀器往往選擇其中一臺(tái)常用儀器，其他儀器做好室內(nèi)質(zhì)量控制，通過(guò)與參加室間質(zhì)評(píng)的儀器做比對(duì)，以保證同一標(biāo)本在不同系統(tǒng)檢測(cè)時(shí)得到具有可比性的結(jié)果。
本次試驗(yàn)顯示，三臺(tái)血細(xì)胞分析儀的精密度均較高，CV值均在允許范圍內(nèi)。CD-3700血細(xì)胞分析儀參加每年的室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)，并且質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀，因此確定CD-3700血細(xì)胞分析儀為參考比對(duì)儀器。新購(gòu)買(mǎi)的XS-800i全血細(xì)胞分析儀和XE-5000血液分析系統(tǒng)作為試驗(yàn)儀器進(jìn)行比對(duì)。相關(guān)與回歸分析結(jié)果顯示，兩臺(tái)試驗(yàn)儀器與比對(duì)儀器的相關(guān)系數(shù)(r)均大于0．975，說(shuō)明X分布范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠，可以用回歸統(tǒng)計(jì)的方法評(píng)估試驗(yàn)儀器與比對(duì)儀器之間的系統(tǒng)誤差。以CLIA''''88能力比對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量要求范圍的1/2作為臨床可接受性能的判斷標(biāo)準(zhǔn)，兩臺(tái)試驗(yàn)儀器的相對(duì)偏倚均在允許范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果可接受。
五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用，大大提高了臨床血液學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量和速度。然而，它們只能作為血液常規(guī)分析過(guò)程中的過(guò)篩手段，遇到一些異常的結(jié)果時(shí)還必須用顯微鏡復(fù)查血片，方能發(fā)出報(bào)告。作者采用五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀篩查，顯微鏡形態(tài)學(xué)復(fù)查，查出血液系統(tǒng)疾病136 例，現(xiàn)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 臨床資料 2006—2007年用五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀對(duì)門(mén)診、病房約6萬(wàn)例進(jìn)行查血液常規(guī)檢查，發(fā)現(xiàn)有異常的做顯微鏡復(fù)查，發(fā)現(xiàn)血液系統(tǒng)疾病136 例。其中急性非淋巴細(xì)胞白血病23 例，急性淋巴細(xì)胞白血病8 例，慢性粒細(xì)胞白血病4 例，多發(fā)性骨髓瘤4 例，巨幼細(xì)胞性貧血35 例，缺鐵型貧血32 例，骨髓增殖性疾病25 例，再生障礙性貧血5 例，他們均為初診患者，并經(jīng)骨髓形態(tài)學(xué)或經(jīng)上級(jí)醫(yī)院檢查證實(shí)。其中男63 例，女73 例，年齡15～81歲。
1.2 檢驗(yàn)方法
1.2.1 儀器 COULTER——HmX血細(xì)胞分析儀及配套試劑，全血質(zhì)控液COULTER公司提供。
1.2.2 方法 常規(guī)消毒法采集靜脈血2 mL(嚴(yán)格按儀器操作規(guī)程進(jìn)行，每天隨機(jī)質(zhì)控)。對(duì)白細(xì)胞數(shù)量及直方圖異常者涂片做瑞-吉染色，計(jì)數(shù)分類(lèi)200個(gè)白細(xì)胞，并作形態(tài)觀察。
2 結(jié)
果
結(jié)果見(jiàn)表1。表1 136例血液病的種類(lèi)和構(gòu)成比血液病名稱(chēng)ANLLALLCMLMMMgAIDAMDSAA病例數(shù)
3 討
論
五分類(lèi)自動(dòng)血液分析儀具有方便、高精度。它是在一個(gè)流式通道內(nèi)，對(duì)單個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行直接、同時(shí)、三重測(cè)量，然后再進(jìn)行三維分析。顯微鏡下觀察的細(xì)胞形態(tài)是細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞質(zhì)的顏色、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無(wú)顆粒及顆粒的性質(zhì)、核的形狀、有無(wú)核仁等。異常白細(xì)胞直方圖粗略地顯示各類(lèi)白細(xì)胞細(xì)胞比例或有無(wú)明顯異常細(xì)胞出現(xiàn)，手工顯微鏡復(fù)查時(shí)注意這些變化的真正病理意義，而不能僅從白細(xì)胞直方圖的變化來(lái)進(jìn)行臨床診斷。堅(jiān)決反對(duì)單位使用血細(xì)胞分析儀后，就一律不再作鏡下復(fù)查和分類(lèi)的錯(cuò)誤傾向［1］。血液分析儀只對(duì)典型的血液病作出提示診斷，以便作進(jìn)一步的檢查。如果對(duì)儀器的計(jì)數(shù)原理，異常報(bào)警掌握不夠，特別是用不配套的稀釋液、溶血素，造成直方圖不典型，往往忽視血涂片檢查，造成誤診和漏診，而血細(xì)胞的質(zhì)和量異常恰恰是血液病的重要表現(xiàn)。所以，對(duì)一些直方圖有異常的患者，一定要鏡檢。本文報(bào)道的136 例血液系統(tǒng)疾病，是從約6 萬(wàn)例標(biāo)本中篩查出來(lái)的，并結(jié)合手工復(fù)檢，經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)證實(shí)。其中血液惡性疾病占陽(yáng)性比例28.5%，各種類(lèi)型的貧血占49.3%。骨髓增殖性疾病占18.4%，再障占3.8%，各種貧血接近占一半，可能與人們的飲食習(xí)慣、疾病的本身有關(guān)。惡性白血病的比例也很大，可能與飲食、居住環(huán)境、工作環(huán)境、自身免疫有很大關(guān)系。但如若大意，定會(huì)漏診和誤診。血液病特別是白血病的診斷主要依靠MICM(形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué))［2］。但在基層工作中，血細(xì)胞分析儀加上形態(tài)學(xué)復(fù)檢和重要的臨床癥狀(出血發(fā)熱、貧血)，可以為血液系統(tǒng)疾病患者做出初步的診斷，使患者得到及時(shí)的治療。
參考文獻(xiàn)
各級(jí)醫(yī)院臨床檢驗(yàn)應(yīng)用中非常廣泛的儀器之一就是血細(xì)胞分析儀，隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的快速發(fā)展和數(shù)據(jù)處理技術(shù)的日新月異，血細(xì)胞分析儀的自動(dòng)化水平和可檢測(cè)維度也越來(lái)越高，給臨床檢驗(yàn)帶來(lái)了極大的方便性和準(zhǔn)確性。筆者在基層醫(yī)院的臨床應(yīng)用中，積累了許多檢測(cè)數(shù)據(jù)和病例，并進(jìn)行了對(duì)比分析，結(jié)合實(shí)際進(jìn)一步探究了影響血細(xì)胞分析儀測(cè)定結(jié)果的實(shí)踐因素。
1 環(huán)境溫度的干擾
實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度決定了儀器、試劑以及標(biāo)本的溫度,計(jì)數(shù)時(shí)稀釋液的溫度應(yīng)為( 22±4) ℃ 。當(dāng)稀釋液的溫度低時(shí),紅細(xì)胞溶解后的膜碎片聚集, 粒度分布曲線的平坦段變短,當(dāng)試劑溫度低于18 ℃時(shí)需加熱使用。有些溶血?jiǎng)┰诘蜏貢r(shí)可出現(xiàn)結(jié)晶, 并不容易被察覺(jué),很難引起操作者的注意,但在顯微鏡下, 可見(jiàn)到其中懸浮著許多細(xì)小的結(jié)晶,這樣的溶血?jiǎng)┑稳胙褐?白細(xì)胞計(jì)數(shù)必然增高。我們基層醫(yī)院地處北方，這種情況在實(shí)際操作中時(shí)有發(fā)生,尤其是在冬季。血細(xì)胞分析儀分析不出稀釋液在低溫時(shí)產(chǎn)生的聚合結(jié)晶，常使分析結(jié)果出現(xiàn)異常。在臨床中可以將溶血?jiǎng)┗蛳♂屢哼M(jìn)行加熱，以升高溫度, 消除結(jié)晶。還可加入適量的非離子表面活性劑,從而減輕溶血?jiǎng)┙Y(jié)晶的發(fā)生。低溫也易激活血小板,引起血小板凝集, 造成血小板計(jì)數(shù)假性降低。
2 抗凝劑的影響
ABX60血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)EDTA-K2 含量不同的靜脈血,臨床結(jié)果表明EDTA-K2 有效抗凝劑量在1.5~ 6. 0mg/ mL時(shí),不影響分析結(jié)果。自制抗凝瓶EDTA-K2 用量1.5~ 2.2mg/ mL為宜。低于1. 5mg/mL時(shí)抗凝效果欠佳, 出現(xiàn)肉眼不易發(fā)現(xiàn)的凝集,可表現(xiàn)為血小板降低。在采血時(shí)，一般2mL的采血量,其誤差在± 0. 5mL范圍內(nèi)的話比較適宜。血量過(guò)多或過(guò)少都會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響,血量過(guò)多抗凝不充分,會(huì)出現(xiàn)凝塊;血量過(guò)少, 會(huì)導(dǎo)致抗凝劑過(guò)濃。筆者分析認(rèn)為，由于血細(xì)胞遇抗凝劑先有一個(gè)短暫的(1~ 2min) 收縮過(guò)程, 這是因?yàn)殁涬x子進(jìn)入血漿以后,改變了滲透壓,導(dǎo)致水從細(xì)胞內(nèi)流出所致。隨后細(xì)胞將鉀離子泵進(jìn)膜內(nèi),細(xì)胞又恢復(fù)原態(tài)。絕大部分患者的標(biāo)本這一時(shí)間只需要幾分鐘, 但也有人需要20~ 30 min。抗凝劑過(guò)濃會(huì)延長(zhǎng)這個(gè)平衡時(shí)間。
3 標(biāo)本放置時(shí)間的影響
筆者通過(guò)觀察總結(jié)，發(fā)現(xiàn)標(biāo)本存放3~ 6 h對(duì)多數(shù)血液分析參數(shù)均有不同程度的影響, 主要影響WBC和PLT 結(jié)果。但有部分標(biāo)本在放置的8h內(nèi)大部分參數(shù)沒(méi)有顯著改變， 而平均血小板體積、血小板分布寬度、大血小板比率和血小板壓積在2h內(nèi)卻有明顯增高。筆者認(rèn)為，標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞分層, 分層的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生不同的代謝物,形成微環(huán)境,此時(shí), 細(xì)胞的體積與其周?chē)奈h(huán)境相適應(yīng), 重新混勻后需重新建立平衡, 最初的1~ 2min收縮,達(dá)到平衡約需30min。這一現(xiàn)象對(duì)血脂較高的標(biāo)本影響更為顯著。
測(cè)定時(shí)間對(duì)血小板的影響更為顯著,在一定的時(shí)間段內(nèi), 隨著時(shí)間的延長(zhǎng), 抗凝劑與血液充分溶融, 松散聚集的血小板逐步解聚,血小板數(shù)值逐步升高。實(shí)際操作中, 由于急需報(bào)告結(jié)果(尤其是急診標(biāo)本) 而使待測(cè)時(shí)間縮短, 往往導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)結(jié)果偏低。
4 生理和病理因素的干擾
在臨床實(shí)踐中,筆者有時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)應(yīng)用血細(xì)胞儀對(duì)新生兒血液進(jìn)行分析時(shí),使用正常量溶血?jiǎng)┯?jì)數(shù)白細(xì)胞, 各項(xiàng)結(jié)果與實(shí)際有差異。筆者認(rèn)為, 由于新生兒處于特殊的生理缺氧狀態(tài),其紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白都高( Hb> 200g/ L)。常規(guī)溶血?jiǎng)┯昧坎荒軐⒓t細(xì)胞完全破壞, 加大溶血?jiǎng)┯昧? 可以使白細(xì)胞正確分類(lèi), 計(jì)數(shù)準(zhǔn)確。因此, 在新生兒血液分析中掌握好溶血?jiǎng)┯昧渴谦@得可靠結(jié)果的關(guān)鍵。
病理因素也可影響血液分析的結(jié)果, 在某些疾病的影響下,當(dāng)平均紅細(xì)胞體積小于70fL時(shí),血小板計(jì)數(shù)假性升高, 這時(shí)需用顯微鏡人工計(jì)數(shù)才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果。
5 采血因素的影響
【關(guān)鍵詞】 白細(xì)胞;細(xì)胞儀分類(lèi);手工分類(lèi)
Reliability analysis of the credibility of WBC by BC-5500 hematology analyzer
XU Jin-hua,HUANG Yu-hui,HUANG Ri-jiao,et al.
Department of Clinical Laboratory,The Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,ZhuhaiGuangdong519000,China
【Abstract】 Objective To analyse the BC-5500 hematology analyzer of the white blood cells to the credibility of the five categories. Methods The classification of the equipment within and between-batch precision measurement,Physical examination were normal people,normal patients and patients with blood diseases diagnosed specimens instruments classified at the same time with the manual classification,and statistical analysis.Results BC-5500 hematology analyzer of the classification of white blood cells good reproducibility and high precision. Conclusion BC-5500 hematology analyzer of the white blood cell classification technology has reached a higher level.
【Key words】 White blood cell; Cytometry classification; Manual classification
作者單位:519000中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院檢驗(yàn)科
本科于2008年引進(jìn)了兩臺(tái)深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的BC-5500血液細(xì)胞分析儀,在使用了一年的時(shí)間里,筆者對(duì)該儀器的分類(lèi)計(jì)數(shù)與手工分類(lèi)進(jìn)行了對(duì)照,以了解該儀器的白細(xì)胞分類(lèi)情況。
1 對(duì)象和方法
1.1 儀器 中國(guó)深圳邁瑞公司的BC-5500; OLYMPUS 3100 顯微鏡;改良Neubauer 計(jì)數(shù)盤(pán)。
1.2 試劑 BC-5500 配套試劑;瑞氏染色液:按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3 版) 》的方法配置[1]。
1.3 標(biāo)本 本院體檢中心體檢者50例,確診的血液病患者50例,其他患者50例。標(biāo)本均為新鮮EDTA -K2抗凝全血。
1.4 方法 采集受檢者空腹靜脈血2 m l,注入由廣州陽(yáng)普醫(yī)療科技股份有限公司提供的含EDTA -K2 的真空管內(nèi)立即輕輕顛倒混勻(8～10 次),3 h內(nèi)檢測(cè)完畢。BC-5500 型分析儀按要求進(jìn)行日常保養(yǎng), 確定儀器處于良好的工作狀態(tài), 每天做室內(nèi)質(zhì)控。
1.4.1 準(zhǔn)確度測(cè)定 分別采集體檢中心體檢者50例,住院部確診的血液病患者50例,其他住院患者50例,先用BC-5500計(jì)數(shù)三次白細(xì)胞的分類(lèi)百分比,再由2名檢驗(yàn)技師嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第3 版)》用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù),每人每份標(biāo)本分別計(jì)數(shù)三次,并對(duì)兩種方法的百分比結(jié)果進(jìn)行分析。
1.4.2 精密度測(cè)定
1.4.2.1 批內(nèi)精密度 取高、中、低三種標(biāo)本分別連續(xù)測(cè)定 11 次,2～11 次求出白細(xì)胞分類(lèi)各項(xiàng) CV(%)。
1.4.2.2 批間精密度 用深圳邁瑞公司提供的質(zhì)控物連續(xù)測(cè)定 20 d,求出白細(xì)胞分類(lèi)各項(xiàng) CV(%)。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11. 0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,比較采用t檢驗(yàn),P
2 結(jié)果
2.1 精密度
2.1.1 批內(nèi)精密度,結(jié)果見(jiàn)表1。
表1
高、中、低 3 種標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的 CV(%)
項(xiàng)目 高值中值低值
中性粒細(xì)胞4.355.105.67
淋巴細(xì)胞 5.015.986.23
嗜酸性粒細(xì)胞 4.865.235.87
嗜堿性粒細(xì)胞3.564.034.99
單核細(xì)胞 5.235.516.01
2.1.2 批間精密度 中性粒細(xì)胞:4.42,淋巴細(xì)胞:4.05,嗜酸性粒細(xì)胞:5.20,嗜堿性粒細(xì)胞:5.23,單核細(xì)胞:5.71;均在儀器設(shè)定的范圍之內(nèi)。
2.2 準(zhǔn)確度 BC5500 型分析儀分類(lèi)與手工法鏡檢分類(lèi)結(jié)果的比較,結(jié)果見(jiàn)表2。
表2
BC5500 型分析儀對(duì)白細(xì)胞的分類(lèi)與手工法鏡檢分類(lèi)結(jié)果的比較
組別細(xì)胞分類(lèi) 例數(shù)儀器分類(lèi)(%)手工分類(lèi)(%)
體檢中心體檢者中性粒細(xì)胞50 55.9±9.00* 54.3±8.60
淋巴細(xì)胞34.7±9.75* 32.6±9.21
嗜酸性粒細(xì)胞 3.20±2.10* 2.96±2.96
嗜堿性粒細(xì)胞0.40±0.40# 0.21±0.20
單核細(xì)胞5.85±1.75# 3.55±2.20
確診的血液病患者1中性粒細(xì)胞46 49.1±36.5* 50.1±34.6
淋巴細(xì)胞47.5±37.7* 42.1±39.5
嗜酸性粒細(xì)胞 5.80±5.10* 5.30±4.98
嗜堿性粒細(xì)胞 0.25±0.25# 0.12±0.10
單核細(xì)胞17.1±16.4# 13.6±13.2
確診的血液病患者2中性粒細(xì)胞4 51.6±33.5
淋巴細(xì)胞43.2±36.1
嗜酸性粒細(xì)胞2.01±2.68
嗜堿性粒細(xì)胞0.41±0.16
幼稚細(xì)胞23.1±10.7
單核細(xì)胞3.61±2.08
其他患者中性粒細(xì)胞5049.5±33.7*47.9±34.8
淋巴細(xì)胞41.6±33.0*39.7±35.1
嗜酸性粒細(xì)胞8.00±7.90*7.56±8.20
嗜堿性粒細(xì)胞0.40±0.30#0.11±0.15
單核細(xì)胞 9.95±5.15#6.53±5.30
注:兩種方法比較,* P>0.05,#P
3 討論
邁瑞公司生產(chǎn)的BC 5500 型分析儀運(yùn)用激光, 流式細(xì)胞術(shù), 細(xì)胞化學(xué)染色等多項(xiàng)技術(shù), 利用細(xì)胞內(nèi)顆粒的密度,核分葉對(duì)激光的折射等先進(jìn)手段, 通過(guò)1°～ 5°的低角度和8°～20°高角度激光散射對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類(lèi)。因此BC 5500型分析儀用于非血液患者的細(xì)胞計(jì)數(shù)是可行的。通過(guò)批內(nèi)和批間精密度結(jié)果分析,BC-5500血細(xì)胞分析儀分類(lèi)計(jì)數(shù)的CV值均在儀器設(shè)定的范圍之內(nèi),精密度較高,重復(fù)性好。對(duì)非特殊性的標(biāo)本,該儀器能夠準(zhǔn)確的作出分類(lèi)。
由表2 可知:無(wú)論普通體檢組還是患者組, 中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞, 儀器分析與手工鏡檢結(jié)果比較差異無(wú)顯著性 (P>0.05)且相關(guān)性非常顯著(r= 0.916)?；颊呓M儀器法伴有不同提示的, 鏡檢分類(lèi)均有不同程度的變化。體檢組和普通患者組單核細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞, 儀器分類(lèi)與鏡檢結(jié)果差異有顯著性(P
綜上所述,BC-5500血細(xì)胞分析儀對(duì)白細(xì)胞的分類(lèi)情況已經(jīng)達(dá)到了較高的水平,足以滿足臨床的基本需要。當(dāng)然,作為一種全血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類(lèi)方法只能作為一種過(guò)篩手段進(jìn)行初檢[3], 對(duì)于血液中各種細(xì)胞的多形態(tài), 多變化的特點(diǎn), 儀器的識(shí)別能力不如人工顯微鏡檢查準(zhǔn)確。在使用全自動(dòng)分析儀時(shí)一定要注意, 先進(jìn)的儀器不能完全替代顯微鏡分類(lèi), 當(dāng)血細(xì)胞數(shù)量、比例、分布圖、散點(diǎn)圖有異常時(shí)[4], 應(yīng)該做血涂片人工鏡檢, 以免漏診異常形態(tài)細(xì)胞和血液系統(tǒng)疾病。
參 考 文 獻(xiàn)
[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.東南大學(xué)出版社,2006:136.
[2] 唐滬強(qiáng), 許凱聲, 揚(yáng)律.STKS 血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類(lèi)結(jié)果評(píng)價(jià).上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志, 1999, 14(2):82.
【關(guān)鍵詞】 血細(xì)胞計(jì)數(shù)；自動(dòng)分析；偏差；對(duì)比研究
本所檢驗(yàn)科于2007年1月購(gòu)入1臺(tái)XS21000i血細(xì)胞分析儀，與原有的邁瑞B(yǎng)C3000和貝克曼COULT同時(shí)使用，為了保證3種儀器測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，本文參照斯德哥爾摩協(xié)議的EP29A文件]要求，以參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)成績(jī)合格的貝克曼COULT血細(xì)胞分析儀為實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確度溯源和可比性的目標(biāo)，即參比儀器，以BC23000和XS21000i為比較檢測(cè)儀器，即測(cè)定儀器，在3種儀器上同時(shí)檢測(cè)患者新鮮標(biāo)本。通過(guò)F檢驗(yàn)和線性回歸分析，計(jì)算參比儀器和測(cè)定儀器之間的偏差來(lái)判斷結(jié)果是否準(zhǔn)確，報(bào)道如下。
1 材料與方法
1.1 標(biāo)本來(lái)源 取健康檢查者乙二胺四乙酸二鉀抗凝全血，白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血小板(PLT)4個(gè)項(xiàng)目分別為高、中、低值標(biāo)本40份，每天選取8份。
1.2 儀器與試劑 貝克曼COULT血細(xì)胞分析儀、希森美康XS21000i血細(xì)胞分析儀、邁瑞B(yǎng)C3000血細(xì)胞分析儀，3種儀器所用試劑均為各公司原裝配套試劑。
1.3 實(shí)驗(yàn)條件 各儀器均按使用說(shuō)明定期維護(hù)、保養(yǎng)，每天開(kāi)機(jī)后進(jìn)行空白允許值及各自質(zhì)控檢測(cè)，保證3種儀器均在控。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法 由技術(shù)熟練者分5 d，每天8份標(biāo)本，每份標(biāo)本在每臺(tái)儀器上檢測(cè)2次，取值為測(cè)定結(jié)果。2種儀器的檢測(cè)模式均為全血模式。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用F檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，直線回歸分析，統(tǒng)計(jì)軟件用SPSS13.0和Excel。
2 結(jié)果
3種儀器4項(xiàng)血細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果及不同儀器間檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)分析及偏差評(píng)估如下。
2.1 4 個(gè)項(xiàng)目3 種儀器測(cè)定結(jié)果比較
2.2 COUL T 和BC3000 的相關(guān)關(guān)系(r 表示相關(guān)系數(shù))
3 討論
醫(yī)院檢驗(yàn)科一般都同時(shí)使用多臺(tái)不同型號(hào)的血細(xì)胞分析儀進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)分析，各儀器都有各自獨(dú)立的試劑系統(tǒng)和質(zhì)控系統(tǒng)，以質(zhì)控物對(duì)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行測(cè)定只是了解單臺(tái)儀器，測(cè)定結(jié)果，而各自專(zhuān)用的全血定值質(zhì)控物不能相互使用，無(wú)法反映各儀器檢測(cè)結(jié)果的一致性。本文參照NCCLS2EP9A方案，以參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)成績(jī)合格的COULT為參比儀器，以BC23000和XS21000i為測(cè)定儀器進(jìn)行比對(duì)測(cè)試。
根據(jù)測(cè)試結(jié)果，以COULT的結(jié)果為自變量X，分別以BC23000和XS21000i的結(jié)果為因變量Y，計(jì)算每臺(tái)儀器4個(gè)項(xiàng)目的相關(guān)系數(shù)(r)和回歸方程，以r2>0.95為相關(guān)性良好。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可接受性判斷可通過(guò)r或r2作粗略估計(jì)，如r和r2均>0.95，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分布范圍合適，直線回歸統(tǒng)計(jì)的斜率和截距可靠，實(shí)驗(yàn)方法精密度較好。本實(shí)驗(yàn)3種儀器
作者單位：721000西安鐵路疾病預(yù)防控制所寶雞分所
檢測(cè)的40份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、Hb3個(gè)項(xiàng)目結(jié)果相關(guān)性密切(r>0.976)，PLT欠佳，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可同時(shí)或交替使用，與文獻(xiàn)報(bào)道相符［1,2］。根據(jù)回歸方程計(jì)算各參數(shù)在給定醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)處的預(yù)期偏差和相對(duì)偏差，以不同Xc允許誤差的限值與預(yù)期偏差值判斷各項(xiàng)目的偏差是否可以接受。參照衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦采用的參考方法的允許偏差范圍，WBC、RBC、Hb、PLT分別為靶值±15%、±6%、±7%、±25%［1］，表明BC23000和XS21000i4個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的偏差均在允許范圍，檢測(cè)結(jié)果是一致的，具有可比性，完全符合臨床需要。
根據(jù)國(guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)文件要求，血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果必須直接或間接溯源至參考方法［2］才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的可比性。本研究用作比對(duì)的參比儀器是參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)合格的COULT，由于衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心為國(guó)家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可委員會(huì)認(rèn)可的校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室，因此，本文的檢測(cè)結(jié)果間接地溯源至參考方法。
參 考 文 獻(xiàn)
［1］ 彭黎明,鄧瑞雪.血細(xì)胞自動(dòng)分析比對(duì)的溯源.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(5):475-477.
有了全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀后,不少操作人員認(rèn)為所有質(zhì)量問(wèn)題均是儀器造成的,與操作人員沒(méi)有關(guān)系,但事實(shí)上在上級(jí)檢驗(yàn)師審簽報(bào)告時(shí)發(fā)現(xiàn)許多問(wèn)題都是由于操作人員的臨床基礎(chǔ)知識(shí)薄弱、業(yè)務(wù)素質(zhì)差、缺乏敬業(yè)精神,對(duì)出現(xiàn)的人為差錯(cuò)缺乏洞察力,導(dǎo)致錯(cuò)誤報(bào)告在上級(jí)檢驗(yàn)師審簽報(bào)告時(shí)才被發(fā)現(xiàn)。
自從我院2004年使用第一臺(tái)血細(xì)胞分析儀開(kāi)始,6年來(lái),在對(duì)3萬(wàn)多張血細(xì)胞分析報(bào)告審核簽字過(guò)程中發(fā)現(xiàn)大量質(zhì)量問(wèn)題并不僅僅在于鏡檢,而更多的問(wèn)題還在于實(shí)驗(yàn)室人員的理論水平、業(yè)務(wù)素質(zhì)和敬業(yè)精神。在血細(xì)胞分析儀普及的今天,儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)已由專(zhuān)人負(fù)責(zé),儀器的校準(zhǔn)、室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)都非常滿足的前提下,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)達(dá)6年來(lái)對(duì)審簽血細(xì)胞分析報(bào)告中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行歸納總結(jié)后得知,真正影響我院血細(xì)胞分析檢驗(yàn)質(zhì)量的因素全在于人,現(xiàn)以日本西森美康的KX-21N三分群血細(xì)胞分析儀為例,將一些在審簽報(bào)告中發(fā)現(xiàn)的引起質(zhì)量問(wèn)題的因素逐一分析如下:
KX-21N檢測(cè)紅細(xì)胞是利用庫(kù)爾特原理,根據(jù)血細(xì)胞是不良導(dǎo)體的特性,在電解質(zhì)溶液中懸浮細(xì)胞顆粒在通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起電阻變化來(lái)進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù),同時(shí)根據(jù)脈沖高低測(cè)定每個(gè)細(xì)胞體積[1]。血紅蛋白是利用光電比色原理來(lái)測(cè)定的,HCT、MCH、MCHC、RDWSD、RDWCV是用RBC、Hb、MCV計(jì)算出來(lái)的。
1RBC、Hb、HCT、WBC、PLT全部增高
因WBC和PLT個(gè)體差異太大,往往不易發(fā)現(xiàn)有人為差錯(cuò),對(duì)單個(gè)RBC升高的報(bào)告也不易發(fā)現(xiàn)人為差錯(cuò),但在審簽連續(xù)3張以上RBC升高的報(bào)告時(shí),我們應(yīng)仔細(xì)檢查一下,凡是科內(nèi)有技術(shù)不熟練的進(jìn)修生和實(shí)習(xí)生參與操作時(shí)更應(yīng)高度重視。我院血細(xì)胞分析常采用預(yù)稀釋模式,當(dāng)上臨床病房采集多個(gè)標(biāo)本后回到檢驗(yàn)科檢測(cè)時(shí),由于細(xì)胞沉降至離心管管底,假如檢測(cè)前未充分混勻,測(cè)定結(jié)果將導(dǎo)致RBC、Hb、HCT、WBC、PLT等多項(xiàng)指標(biāo)顯著升高。假如在臨床提供的靜脈血中取樣進(jìn)行預(yù)稀釋模式檢測(cè)或直接行全血模式檢測(cè),取樣前混勻不徹底也常引起RBC、Hb、HCT、WBC、PLT等多項(xiàng)指標(biāo)顯著升高。怎樣才能徹底混勻,檢驗(yàn)科部分工作人員各行其事,全憑自己想象,根本不去實(shí)踐或不接受曾經(jīng)通過(guò)實(shí)踐得出的經(jīng)驗(yàn)指導(dǎo),實(shí)踐證實(shí)將采血管中的標(biāo)本顛倒混勻5次以上才能達(dá)到徹底混勻。預(yù)稀釋模式檢測(cè)時(shí),稀釋液加量不足導(dǎo)致RBC、Hb、HCT、WBC、PLT等多項(xiàng)指標(biāo)顯著升高也曾多次發(fā)生。一是用移液器代替刻度吸管,因移液器活塞漏氣,使所加稀釋液的量偏少;另有人將500μ加成400μl,經(jīng)驗(yàn)豐富者發(fā)現(xiàn)這些差錯(cuò)并不難,一是上述檢測(cè)項(xiàng)目全部升高,二是檢測(cè)一次后剩余量較少或一份標(biāo)本不夠2次檢測(cè)。
關(guān)鍵詞:網(wǎng)織紅細(xì)胞;全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀;瘧原蟲(chóng)
Evaluation of performance of ADVIA2120blood-counter system for detection of reticulocytes.
Abstract:Objective To evaluate the performance of ADVIA2120for the test of reticulocytes. Methods ADVIA2120was used for detection of high/normal/low reticulocyte samples and the reproducibility，the rate of carrying contamination and stability were observed.The results were compared with manual method. Results Reproducibility:except that the CV of high nucleic acid was13.82%～17.4%，the CV of the other indexes was less than8.19%;linearty:r=0.9979;stability:percentage CV of Ret at4℃in24hwas3.8%;the rate of carrying contamination was0.22%;compared with the manual methods:r=0.9962，P>0.05. Conclusion The srate of carrying contamination by using ADVIA2120blood-counter system in test of reticulocytes is low，stable and showing a nice linear correlation suitable for clinical use.
Key words:Reticulocytes;Automatic blood-counter system;Plasmodium
網(wǎng)織紅細(xì)胞（Reticulocytes，Ret）傳統(tǒng)的人工測(cè)定煩瑣而費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性受操作人員的經(jīng)驗(yàn)、水平、細(xì)胞計(jì)數(shù)量、染色效果及涂片質(zhì)量等因素影響大，重復(fù)性也差。全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞應(yīng)用逐漸增多，因臨床應(yīng)用時(shí)間不長(zhǎng)，其性能尚有待觀察。ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀是拜耳公司新推出的五分類(lèi)機(jī)型，配備全自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能，可提供14項(xiàng)相關(guān)參數(shù)，因部份指標(biāo)臨床意義尚無(wú)確論，故本文僅選擇6項(xiàng)與細(xì)胞數(shù)量相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)?，F(xiàn)進(jìn)行重復(fù)性、線性、攜帶污染率、穩(wěn)定性測(cè)試，并與手工百分率分類(lèi)結(jié)果進(jìn)行比較，報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 資料
1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 住院患者，網(wǎng)織紅細(xì)胞按儀器初步測(cè)量結(jié)果分為高、中、低三類(lèi)。
1.1.2 設(shè)備 美國(guó)ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、日本OLYMPUSBX-60多功能光學(xué)顯微鏡、上海醫(yī)療設(shè)備廠HH-W21-600電熱恒溫水育箱、姜堰康健醫(yī)療器具有限公司KJRM-1搖勻器。
1.1.3 ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀原裝配套試劑及全血質(zhì)控品（批號(hào)0605204）;珠海貝索公司網(wǎng)織紅細(xì)胞染液和瑞氏染液，按試劑使用說(shuō)明操作。廣州陽(yáng)普公司EDTA-K2血常規(guī)抗凝管（批號(hào)0602012）。
1.2 方法 按相關(guān)評(píng)價(jià)原則，ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀重復(fù)測(cè)定樣本，評(píng)價(jià)儀器日內(nèi)精密度、日間精密度、線性、攜帶污染率和穩(wěn)定性，測(cè)定前搖勻器正、反向搖動(dòng)3min。
1.2.1 日內(nèi)精密度 按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NC-CLS）制定的方案 ［1］ ，選擇本院住院患者血樣，網(wǎng)織紅細(xì)胞按儀器初步測(cè)量結(jié)果分為高、中、低三類(lèi)，各1份，每份重復(fù)測(cè)定10次，并計(jì)算平均值（x）和變異系數(shù)（CV）。
1.2.2 日間精密度 因臨床血標(biāo)本穩(wěn)定性差，故以原廠全血質(zhì)控品每日9:00、12:00、16:30測(cè)定三次，取均值，連續(xù)測(cè)定10d，并計(jì)算平均值（x）和變異系數(shù)（CV）。
1.2.3 線性評(píng)價(jià) 按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）制定的線性驗(yàn)證方案EP6-A ［2］ ，選擇一份網(wǎng)織紅細(xì)胞細(xì)胞高值樣本，在技術(shù)指標(biāo)范圍內(nèi)做比例稀釋?zhuān)瑑x器測(cè)定各濃度2次，取均值，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析。
1.2.4 攜帶污染率 按國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)制定的程序 ［3］ ，將高值樣本連續(xù)測(cè)定3次（H 1 、H 2 、H 3 ），緊接著連續(xù)測(cè)定低值樣本3次（L 1 、L 2 、L 3 ），攜帶污染率結(jié)果為［（L 1 ～L 3 ）/（H 3 -L 1 ）］×100%。
1.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 因血樣皆為低溫保存，考慮溫度為主要影響因素。取一份血樣分為3管，放置于4℃冰箱。分別于0min、15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、24h、48h、72h每個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定3次，取均值。
1.2.6 相關(guān)性評(píng)價(jià) 按NCCLS H20-A1 ［4］ 文件，將30份標(biāo)本制作3張血片，2名有經(jīng)驗(yàn)的主管技師隨機(jī)各選一張，雙盲法計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率 ［5］ ，取均值后與儀器測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性比較。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)和回歸分析。
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2 結(jié)果
2.1 日內(nèi)精密度測(cè)試 高值項(xiàng)目日內(nèi)精密度較好，低值項(xiàng)目高核酸濃度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率（%）日內(nèi)精密度偏大。見(jiàn)表1。
表1 ADVIA2120網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定日內(nèi)精密度（略）
2.2 日間精密度測(cè)試 高值項(xiàng)目日間精密度較好，低值項(xiàng)目高核酸濃度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率（%）日精密度偏大。見(jiàn)表2。
表2 ADVIA2120網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定日間精密度（略）
2.3 線性評(píng)價(jià) 初始計(jì)數(shù)為0.38×10 12 /L的樣本按比例稀釋后理論結(jié)果為（0.304、0.228、0.152、0.076、0.038）×10 12 /L，實(shí)際測(cè)定結(jié)果為（0.298、0.231、0.148、0.063、0.033）×10 12 /L，得回歸曲線y=1.0225x-0.0086，相關(guān)系數(shù)r為0.9989，P>0.05。（見(jiàn)圖1）
2.4 攜帶污染率 高值樣本3次測(cè)定結(jié)果分別為H 1 =0.64×10 12 /L、H 2 =0.67×10 12 /L、H 3 =0.65×10 12 /L，低值樣本3次測(cè)定結(jié)果分別為L(zhǎng) 1 =0.03×10 12 /L、L 2 =0.03×10 12 /L、L 3 =0.02×10 12 /L，攜帶污染率0.22%。穩(wěn)定性試驗(yàn):4℃冷藏后測(cè)定，百分率結(jié)果均值分別為6.42%（0min）、6.18%（15min）、6.27%（30min）、6.19%（45min）、6.33%（1h）、6.22%（2h）、6.34%（3h）、6.28%（4h）、6.21%（5h）、6.35%（6h）、6.37%（7h）、6.25%（24h）、5.68%（48h）、5.21%（72h），結(jié)果顯示24h內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），48h后網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率降 低，變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。
圖1 ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞線性評(píng)估（略）
圖2 網(wǎng)織紅細(xì)胞ADVIA2120測(cè)定與手工法測(cè)定相關(guān)性（略）
3 討論
網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定在各種貧血的鑒別診斷、療效觀察、腫瘤患者放、化療后骨髓造血功能評(píng)估等有著重要的臨床意義，及時(shí)、準(zhǔn)確的網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定有利于動(dòng)態(tài)了解骨髓紅系增生情況。ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定原理是先用戊二醛和十二烷基硫酸鈉將紅細(xì)胞球形化并固定，氧氮雜芑750使RNA染藍(lán)色，著色程度與RNA含量成正比，細(xì)胞通過(guò)FLOWCELL在激光照射下產(chǎn)生散射，應(yīng)用MIE原理，得到網(wǎng)織紅細(xì)胞的14項(xiàng)測(cè)量參數(shù)和計(jì)算參數(shù)，因?qū)W(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白濃度分布寬度、血紅蛋白含量分布寬度等指標(biāo)臨床意義尚無(wú)確論，故僅選擇6項(xiàng)與細(xì)胞數(shù)量相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
從結(jié)果看，ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定具有良好的精密度，除高核酸濃度網(wǎng)織紅細(xì)胞比率因計(jì)數(shù)值較低，故cv值在日內(nèi)和日間偏大外（13.82%～17.4%），其它項(xiàng)目cv值在1.18%～8.19%之間，處于理想范圍之內(nèi)。穩(wěn)定性測(cè)試表明4℃24h內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率結(jié)果穩(wěn)定，結(jié)果的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，CV3.8%），48h后網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率降低。低溫雖能減緩紅細(xì)胞新陳代謝，但網(wǎng)織紅細(xì)胞向成熟紅細(xì)胞的轉(zhuǎn)化未完全停止，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致RNA降低的比率增高并出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05，圖1），攜帶污染率低（0.22%），達(dá)到臨床應(yīng)用要求。與手工法的百分率結(jié)果比較相關(guān)性佳（r=0.9962，P>0.05，圖2），考慮到儀器法檢測(cè)細(xì)胞數(shù)量大，可有效避免細(xì)胞在血片分布上的統(tǒng)計(jì)學(xué)誤差，特別是低值測(cè)量結(jié)果，因此儀器法應(yīng)更為理想。臨床應(yīng)用中遇1例瘧疾患者樣本，入院儀器查血色素68g/L，RBC2.23×10 12 /L，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)0.32×10 12 /L，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率14.35%，經(jīng)外周血片瑞氏染色，感染蟲(chóng)體之RBC為10.3%（計(jì)數(shù)1000個(gè)RBC），抗瘧治療3周后查血色素85g/L，RBC3.03×10 12 /L，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)0.08×10 12 /L，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率2.64%，外周血片瑞氏染色未查見(jiàn)蟲(chóng)體和受染RBC。文獻(xiàn)報(bào)道受瘧原蟲(chóng)感染的RBC中RNA含量是增加的 ［6］ ，那受染RBC在RNA增高時(shí)是否歸為網(wǎng)織紅及RNA不高時(shí)如何區(qū)分則缺乏妥善的處理辦法。在手工煌焦油藍(lán)活體染色、ADVIA2120的氧氮雜芑750染色及sysmex2100的熒光染色不能分辨的情況下，對(duì)瘧疾血樣做外周血片瑞氏染色，計(jì)數(shù)受染細(xì)胞比例，可大致判定干擾程度。
總體而言，ADVIA2120全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞測(cè)定避免了傳統(tǒng)手工法的諸多缺點(diǎn)，如肉眼判讀的主觀性、細(xì)胞的分布誤差、檢測(cè)的低效率等問(wèn)題，在全血分析時(shí)可根據(jù)情況隨時(shí)選擇加做網(wǎng)織紅分析，無(wú)需再取血樣，其便利性和高效性是手工法無(wú)可比擬的，加之重復(fù)性、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性及攜帶污染率各指標(biāo)均符合臨床應(yīng)用要求，在有條件的醫(yī)院全自動(dòng)儀器法測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞是很好的選擇。
參考文獻(xiàn)
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