急性白血病細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)檢測情況分析

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摘要：評估流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測外周血白血病細(xì)胞在急性白血病患者的應(yīng)用價值。方法：2017年1-12月收治急性白血病患者130例，其中急性髓系白血病80例，急性淋巴白血病50例。采集所有患者血液樣本，通過FCM檢測外周血白血病細(xì)胞。分析檢驗結(jié)果，評估預(yù)后。結(jié)果：FCM檢測急性髓系白血病的敏感性、陰性預(yù)測值顯著高于急性淋巴白血病，特異性低于急性淋巴白血病，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。MRD陽性患者復(fù)發(fā)率高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：急性白血病患者外周血白血病細(xì)胞臨床檢測中，流式細(xì)胞術(shù)具有較高敏感性與特異性，可作為評估患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：急性白血??；外周血白血病細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)；預(yù)后

急性白血病的發(fā)生與環(huán)境污染、遺傳、生活方式等各種因素有關(guān)[1]，是一種臨床發(fā)病率較高的非實體腫瘤，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，同時也給家庭造成沉重經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。隨著近年來臨床對白血病研究的深入，越來越多先進(jìn)治療方案得以落實，如果白血病患者能夠在發(fā)病早期得到有效治療，仍有相當(dāng)高緩解率，但同時也伴有較大復(fù)發(fā)風(fēng)險。資料表明[2]，急性白血病患者主要復(fù)發(fā)原因是體內(nèi)腫瘤細(xì)胞沒有被完全清除，機體內(nèi)仍存在微小殘留病變(MRD)，如果殘留的腫瘤細(xì)胞持續(xù)增殖，就會導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)。白血病細(xì)胞表型與異常光散射的特點非常突出[3]，屬于表面抗原，因此臨床主張采用FCM識別不同抗原的熒光信號，以提高臨床診斷準(zhǔn)確率。本研究采集急性白血病患者外周血樣本130例，應(yīng)用FCM技術(shù)檢測白血病細(xì)胞，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

2017年1-12月收治急性白血病患者130例，男73例，女57例；年齡21～67歲，平均(37.69±2.46)歲；病理分型：急性髓系白血病80例，急性淋巴白血病50例。所有患者均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，所有患者及家屬均簽署知情同意書。排除依從性差、無法完成隨訪、急性早幼粒細(xì)胞白血病、精神疾病。方法：采集患者空腹?fàn)顟B(tài)下的外周靜脈血3mL，乙二胺四乙酸二鉀抗凝處理后，將1×106的有核細(xì)胞加入試管中，選擇與患者病情特點相符的熒光素標(biāo)記的單克隆抗體，按照說明書進(jìn)行規(guī)范操作。應(yīng)用FACSCalibur流式細(xì)胞儀收集具有分析價值的有核細(xì)胞10萬個以上，并用配套軟件分析。MRD的判定參考原始細(xì)胞抗原有無跨系表達(dá)、表達(dá)是否同步、表達(dá)是否丟失、表達(dá)的強弱等因素，MRD陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)為≥0.01%，否則可判定為陰性。對130例患者骨髓細(xì)胞進(jìn)行6～8張骨髓液涂片，經(jīng)吉姆薩-瑞士染色處理后，在顯微鏡油鏡下對200個細(xì)胞進(jìn)行分類，對參考細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行分類計數(shù)，將《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》作為是否復(fù)發(fā)的判斷依據(jù)。觀察指標(biāo)[5]：比較FCM檢測急性髓系白血病與急性淋巴白血病的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。統(tǒng)計隨訪12～18個月MRD陽性和陰性患者復(fù)發(fā)情況。WHO明確提出，將骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)的檢測結(jié)果作為臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，增生Ⅰ～Ⅱ級；原始細(xì)胞增多≥20%。統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件處理；計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

FCM檢測急性白血病的敏感性、特異性比較：FCM檢測對急性髓系白血病的敏感性和陰性預(yù)測值顯著高于急性淋巴白血病，特異性低于急性淋巴白血病，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。兩種病理分型陽性預(yù)測值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。MRD與復(fù)發(fā)之間關(guān)系：MRD陽性104例，復(fù)發(fā)77例，復(fù)發(fā)率為74.04%；MRD陰性26例，復(fù)發(fā)6例，復(fù)發(fā)率為23.08%。MRD陽性患者復(fù)發(fā)率高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

討論

急性白血病除發(fā)病率較高之外，治療后還存在相當(dāng)大復(fù)發(fā)風(fēng)險。急性白血病發(fā)生機制為造血干細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖，長時間在骨髓中大量累積，最終阻斷骨髓造血功能。白血病細(xì)胞主要是以單細(xì)胞形式存在，屬于天然單細(xì)胞懸液，F(xiàn)CM技術(shù)針對的正是單個散在細(xì)胞，因此可用于白血病細(xì)胞檢測。FCM通過熒光對單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，分析細(xì)胞表面或內(nèi)部成分，還可以通過核酸染料對細(xì)胞內(nèi)部RNA、DNA進(jìn)行檢測，從而分析細(xì)胞pH值、鈣離子濃度及細(xì)胞的攝取、吞噬功能，還能夠檢測細(xì)胞培養(yǎng)液及血清中可溶性成分。骨髓形態(tài)學(xué)檢查是評估急性白血病患者臨床療效重要依據(jù)，但該檢測結(jié)果具有局限性，如果只能體現(xiàn)一部分骨髓情況，那么只有在患者機體內(nèi)白血病細(xì)胞的比例＞1%的情況下才能檢測出來，患者也很難耐受反復(fù)的穿刺。因此FCM成為檢測MRD的主要方法。研究發(fā)現(xiàn)[6]，一部分急性白血病患者在經(jīng)過放療治療后，盡管能夠殺死白血病細(xì)胞，但無法達(dá)到根治效果，仍有患者因存在MRD陽性而復(fù)發(fā)，因此，完全緩解的時期與程度是影響患者預(yù)后的重要參考指標(biāo)。本研究中，F(xiàn)CM對急性髓系白血病的敏感性達(dá)到97.38%，對急性淋巴白血病的特異性為45.83%。提示FCM檢測結(jié)果可作為急性白血病患者預(yù)后評估的指標(biāo)水平。同時，MRD陽性患者復(fù)發(fā)率要顯著高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。臨床應(yīng)參考多方面檢測指標(biāo)和結(jié)果，對患者采取個性化的治療措施。

參考文獻(xiàn)

[1]葛麗衛(wèi),王笑顏.流式細(xì)胞術(shù)用于白血病外周血細(xì)胞檢測對急性白血病復(fù)發(fā)判斷的意義[J].檢驗醫(yī)學(xué),2018,33(3):239-241.

[2]汪宏梅,張云寧,羅云.流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測急性髓細(xì)胞白血病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的效果分析[J].實用臨床醫(yī)藥雜志,2017,21(21):36-38.

[3]王申.流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血白血病細(xì)胞在急性白血病復(fù)發(fā)診斷中的應(yīng)用價值[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報,2018,24(23):3669-3671.

[4]李焱,葉敬偉,郭曉玲.IL-12、IL-15對急性髓系白血病患者骨髓來源CD34+白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)化為NK細(xì)胞作用研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2019,24(1):32-37.

[5]曹麗霞,陳連香.RNA甲基化"閱讀器"蛋白YTHDF2在急性髓系白血病中的作用[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2018,38(12):1727-1732.

[6]楊志剛,文瑞婷,鄭桂仙,等.調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及Th1/Th2細(xì)胞因子在急性白血病中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2018,26(22):3641-3644.

作者：胡紅波 彭敏源 劉蘇 單位：415000湖南省常德市第一人民醫(yī)院檢驗科