去卵巢小鼠學(xué)習(xí)記憶能力探析

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【摘要】目的觀察去卵巢（OVX）小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦超微結(jié)構(gòu)的改變。方法12只雌性C57BL／6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（SHAM組），去卵巢組（OVX組），造模后繼續(xù)喂養(yǎng)12w。采用Morxi＾JC迷宮測試認(rèn)知能力，透射電鏡檢測小鼠大腦超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果與SHAM組對比，OVX組小鼠的逃避潛伏期顯著增加（P＜〇．〇5），穿越平臺(tái)次數(shù)顯著減少（P＜0．05）；0VX組小鼠海馬神經(jīng)元出現(xiàn)明顯的超微結(jié)構(gòu)改變，包括核膜破裂、核仁邊界不清；線粒體數(shù)量減少、體積增大；高爾基體腫脹變大等。結(jié)論0VX小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降，可能與海馬超微結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】去卵巢小鼠；海馬；超微結(jié)構(gòu)

更年期最常見的癥狀之一是認(rèn)知障礙和記憶障礙。先前的研究已經(jīng)表明，隨著絕經(jīng)后雌激素水平的降低，老年癡呆癥和記憶損害的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加［1］。卵巢切除術(shù)后，由于雌激素缺乏，小鼠的學(xué)習(xí)和記憶受影響［3］。因此本實(shí)驗(yàn)觀察去卵巢小鼠（ovariectomized，0VX）學(xué)習(xí)記憶能力及大腦海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的變化，探討絕經(jīng)后發(fā)生認(rèn)知減退的可能機(jī)制。

1資料與方法

1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑與儀器

12只健康，12wC57BL／6雌性小鼠，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。3％戊二醛（廣州市化學(xué)試劑廠），Morris7jC迷宮（上海吉量科技公司），透射電鏡（JEM－1400，日本）。

2．動(dòng)物分組及模型制備

手術(shù)操作按參考文獻(xiàn)［4］進(jìn)行，手術(shù)前禁食12h，腹腔注射1％戊巴比妥鈉麻醉小鼠，俯臥位固定，消毒；手術(shù)組，摘除卵巢。假手術(shù)組在沒有切除卵巢的情況下，進(jìn)行了同樣的手術(shù)。實(shí)驗(yàn)過程符合西安醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)指定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求。3．Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)術(shù)后喂養(yǎng)12w，兩組小鼠進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，上下午各2次，兩組小鼠分別從4個(gè)不同的人水點(diǎn)放人水中，記錄兩組小鼠尋找平臺(tái)所需的時(shí)間（2min內(nèi)）。撤除平臺(tái)，將兩組小鼠從任一入7jC點(diǎn)放入7jC池，記錄跨越平臺(tái)的次數(shù)（lmin內(nèi)）。

4．小鼠海馬蘇木精－伊紅染色

固定標(biāo)本蘇木精浸泡5min，2次，7jC洗30s，伊紅溶液浸泡30s，梯度乙醇脫水，透明處置，封片，倒置光學(xué)顯微鏡觀察和拍片。

5．海馬組織電鏡觀察

將切割成1mm3的小鼠海馬組織置于3％戊二醛溶液中。41；處置2h，PBS溶液漂洗，置于1％四氧化鋨溶液中41固定，梯度醇脫水，置換，浸泡，包埋，聚合，光學(xué)顯微鏡定位，超薄切片，醋酸鈾、檸檬酸鉛染色，透射電子顯微鏡觀察、照相。

6．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21．0統(tǒng)計(jì)軟件，用（元±s）來表示數(shù)據(jù)。采用配對i檢驗(yàn)，以P＜〇．〇5為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

1．Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表）

結(jié)果顯示0VX組逃避潛伏期為（23．554．21）s，顯著長于SHAM組（12．793．26）s，（P＜0．05）；0VX小鼠跨越平臺(tái)次數(shù)為（1．890．78）次，顯著少于SHAM組（5．980．99）次，（iM）＿05）。

2．小鼠海馬病理改變比較（圖1）

通過蘇木精－伊紅染色觀察，SHAM組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整清晰、排列整齊、層次清晰，呈3￣5層；0VX組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量減少、層次不清，層數(shù)減少，細(xì)胞松散，間隙增加。

3．小鼠海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變（圖2）

SHAM組小鼠海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)無異常改變。0VX組海馬神經(jīng)元出現(xiàn)明顯的病理性超微結(jié)構(gòu)改變，包括核膜破裂、核仁邊界不清、周圍間隙增大；線粒體數(shù)量減少、體積增大；高爾基體腫脹變大等。

3討論

衰老會(huì)影響認(rèn)知功能的各個(gè)方面，隨著年齡的增長，認(rèn)知能力下降的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)增加。有證據(jù)表明，隨著年齡的增長，記憶等認(rèn)知功能會(huì)受到影響，這可能與大腦某些區(qū)域的神經(jīng)元喪失有關(guān)［5＜。一般來說，大多數(shù)患有阿爾茨海默病的患者是女性，而且女性患認(rèn)知障礙的風(fēng)險(xiǎn)比男性高。盡管這種差異可能與女性壽命的延長有關(guān)，但絕經(jīng)期雌激素的急劇下降也可能導(dǎo)致這種情況。研究顯示長期喪失卵巢功能可顯著增加神經(jīng)系統(tǒng)疾病引起癡呆和死亡的風(fēng)險(xiǎn)［7＿11］0本文通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，0VX組小鼠的逃避潛伏期增加，跨越平臺(tái)次數(shù)減少；說明去卵巢后，由于雌激素缺乏，小鼠的學(xué)習(xí)和記憶均受損，與之前的研究一致［12＿13］。蘇木精－伊紅染色發(fā)現(xiàn)0VX組小鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元呈現(xiàn)層次不清、排列紊亂、神經(jīng)元數(shù)量減少、細(xì)胞松散、層數(shù)變少等病理性改變，該結(jié)果與Guan及Ma的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致［14＿＇透射電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示，0VX組海馬神經(jīng)元細(xì)胞器出現(xiàn)明顯的超微結(jié)構(gòu)病變，表現(xiàn)為核膜破裂、核仁邊界不清；線粒體數(shù)量減少、體積增大；高爾基體腫脹變大、空泡等。OVX組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的病理改變及神經(jīng)元細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)的改變，可能是導(dǎo)致OVX組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力受損的重要原因之一。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)OVX小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降，可能與海馬超微結(jié)構(gòu)改變有關(guān)。

作者:魏明 田甜 劉鵬 甘露 單位:陜西省人民醫(yī)院婦科