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顯微攝影,是一種應(yīng)用照相設(shè)備記錄顯微鏡下所觀察到的內(nèi)容的攝影形式。在醫(yī)學(xué)、檢疫等領(lǐng)域,它是科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)交流及病理診斷中不可缺少的手段。要取得良好顯微攝影效果,最重要的是擁有技術(shù)指標(biāo)過硬的顯微鏡設(shè)備、攝影設(shè)備及高超的操作技術(shù)。
談到顯微鏡,相信大家對列文虎克(Antonie van Leeuwenhoek,1632~1723)這個名字并不陌生。這位荷蘭商人、科學(xué)家、微生物學(xué)家,被世界公認(rèn)的突出成就便是推動了顯微鏡及微生物學(xué)的發(fā)展。
憑借勤奮及特有的天賦,列文虎克磨制透鏡的水平遠(yuǎn)超同時代其他人。列文虎克制作了多種類型的放大透鏡以及簡單的顯微鏡,使用的材料涉及玻璃、寶石、鉆石,等等。列文虎克一生磨制了500多枚透鏡,其中一架有幸保存下來的透鏡,其放大率可達(dá)275倍。人們猜測列文虎克研制了放大500倍的透鏡。作為先行者和開拓者,列文虎克帶領(lǐng)人類開始逐步認(rèn)識透鏡下奇妙的微觀世界,從而拉開人類對微生物領(lǐng)域認(rèn)知的序幕。
凸透鏡,也就是平時俗稱的“放大鏡”,是顯微鏡制造的核心部件。早在中國戰(zhàn)國時期,《墨子》一書中就詳細(xì)敘述了透鏡成像規(guī)律。當(dāng)時的人們通過研磨透光度較好的天然水晶來制造凸透鏡,然而這種技術(shù)并不成熟且成本過高,難以普及。公元13世紀(jì),旅行家馬可·波羅(Marco Polo,1254~1324)將中國的透鏡傳入歐洲。勤奮而又技術(shù)精湛的歐洲工匠通過反復(fù)研究與嘗試,逐漸掌握磨制透鏡的技術(shù)。更重要的是,在當(dāng)時的歐洲,玻璃制造業(yè)已相當(dāng)發(fā)達(dá),歐洲人用廉價的玻璃來磨制透鏡,這也使透鏡很快得到普及。曾經(jīng)只有貴族階層才買得起的放大鏡、眼鏡等用品,漸漸步入尋常百姓家。同時,這種透鏡制造技術(shù)的成熟與材質(zhì)的變革,也為第一架顯微鏡橫空出世奠定了基礎(chǔ)。
復(fù)式顯微鏡問世
事實上,自凸透鏡制造技術(shù)普及后,人們便利用其將物體“放大”的光學(xué)特性,開始制造能夠觀察微小物體的設(shè)備。早在1590年,荷蘭和意大利的眼鏡制造商已經(jīng)設(shè)計并制造出類似顯微鏡的放大儀器,這種儀器只有一片凸透鏡,被稱為單式顯微鏡(Simple Microscope)。
然而,單式顯微鏡有個致命缺點:它的焦距與透鏡直徑成正比,而焦距又與放大倍數(shù)成反比。也就是說,焦距越短,放大倍數(shù)越大,透鏡直徑越小。舉例來說,假如放大倍數(shù)100倍,透鏡的焦距是0.25毫米,透鏡直徑約為0.33毫米。這個比針尖還小的透鏡就那時的技術(shù)而言根本制造不出來。因此,當(dāng)時單式顯微鏡的放大倍數(shù)最多不過25倍。
為觀察更細(xì)微物體,人們迫切需要一種更好的放大工具。公元16世紀(jì)末,荷蘭的詹森父子發(fā)明了第一臺簡單的復(fù)式顯微鏡(Compound Microscope)。這個顯微鏡由3個鏡筒組成,中間鏡筒較粗,用于手握。另外兩個鏡筒分別插入兩端,可以自由伸縮,從而達(dá)到聚焦的目的。兩片凸透鏡作為鏡頭,固定在鏡筒兩端:物鏡是只有一個凸面的單凸透鏡,目鏡則是有兩個凸面的雙凸透鏡。當(dāng)這個顯微鏡的兩個活動鏡筒完全收攏時,它的放大倍數(shù)是3倍;當(dāng)兩個活動鏡筒完全伸出時,它的放大倍數(shù)是10倍,這也是最早的一支光學(xué)變焦鏡頭。
復(fù)式顯微鏡在性能上明顯優(yōu)于單筒顯微鏡。一是它的放大率提高,通過把幾個放大倍數(shù)較小的凸透鏡組合從而獲得更高的放大倍率;二是制造工藝簡單,不必再去思考如何磨制直徑極小的透鏡。復(fù)式顯微鏡的發(fā)明是一個里程碑,人類從此開始能更好地認(rèn)識微觀世界。不過,由于技術(shù)條件不成熟,16世紀(jì)的顯微鏡放大倍數(shù)并不高,因此這一時期人類在探索微觀世界方面也沒什么激動人心的發(fā)現(xiàn),直到17世紀(jì)列文虎克橫空出世。
關(guān)于復(fù)式顯微鏡的發(fā)明過程有個傳說—
詹森有個淘氣的兒子。一天,他溜進(jìn)父親的作坊里摸摸動動,偶然拿起兩塊鏡片放到銅管的兩端,發(fā)現(xiàn)通過這個銅管看書時書上的字大得嚇人。于是他把這件事告訴了父親。詹森知道后非常興奮,并讓兒子幫助他制成了世界上第一架復(fù)式顯微鏡……
這個故事的真實性無從考證,不過這絲毫不影響詹森父子和他們研制的復(fù)式顯微鏡在人類文明史上,留下濃墨重彩的印記。
相機(jī)遇上顯微鏡
有時候,我們不得不驚嘆人類自身的創(chuàng)造力—敢于將一項剛剛誕生的新技術(shù)與以往的成熟技術(shù)結(jié)合,碰撞出新的文明火花。
在復(fù)式顯微鏡誕生200多年后,又一種偉大的光學(xué)儀器—照相機(jī)—問世。1839年,法國化學(xué)家路易·達(dá)蓋爾(Louis-Jacques-Mandé Daguerre,1787~1851)發(fā)明的攝影法在法國科學(xué)院的雜志上公布。接下來,攝影術(shù)迅速普及并得到不斷改良。不久,顯微攝影器材被德國人發(fā)明。
在認(rèn)識世界,認(rèn)識美的歷史中,顯微攝影登上了舞臺。
在顯微鏡問世,照相機(jī)還未被發(fā)明的這段時間中,世界各地的科學(xué)家一直在不斷嘗試觀察、了解我們的微觀世界。此前,科學(xué)家為記錄自己的觀察成果,必須一邊認(rèn)真觀察顯微鏡下的情況,一邊用畫筆在紙上繪出所看到的一切。這種傳統(tǒng)記錄方式的弱點,在于并非所有微生物學(xué)家都具備高超的繪畫水平,所以人們的手繪記錄或抄本內(nèi)容必然會與當(dāng)初在鏡下的實際觀察結(jié)果有差異。這些差異,會使研究結(jié)果的準(zhǔn)確性、嚴(yán)謹(jǐn)性在傳播、推廣和教學(xué)過程中大打折扣。
直到顯微攝影技術(shù)出現(xiàn),才使這個難題被攻克。發(fā)明家將一支外接鏡筒置于顯微鏡的目鏡與照相機(jī)鏡頭之間,使顯微鏡下的光線能夠通過目鏡及外接鏡筒,進(jìn)入照相機(jī)內(nèi)部,從而在底片或是感光元件上留下影像。正是這項看似簡單的發(fā)明,揭開了微觀攝影的序幕。
現(xiàn)代顯微攝影
顯微鏡發(fā)展至今,無論是外形還是功能,都發(fā)生了巨大的改變。
由于應(yīng)用領(lǐng)域不同,顯微鏡也衍生出各種不同種類。如今,醫(yī)學(xué)常用的光學(xué)顯微鏡主要類型有明視野顯微鏡/暗視野顯微鏡/相位差顯微鏡/視頻顯微鏡/熒光顯微鏡/偏光顯微鏡/超聲波顯微鏡/解剖顯微鏡/共聚焦顯微鏡,等等。同時,各類電子顯微鏡也被廣泛應(yīng)用于病理診斷和醫(yī)學(xué)研究中。它們在觀察不同的標(biāo)本時發(fā)揮各自獨特的優(yōu)勢。
以暗視野顯微鏡(Dark field microscope)為例,它是光學(xué)顯微鏡的一種,它的聚光鏡中央有擋光片,使照明光線不直接進(jìn)入物鏡,只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡,因而視野的背景是黑的,物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到4~200納米的微粒子,分辨率比普通顯微鏡高50倍,臨床常用于檢查蒼白的螺旋體—這是一種病原體檢查,對早期梅毒的診斷有重要意義。同時,暗視野顯微鏡常用來觀察未染色的透明樣品。這些樣品因為具有和周圍環(huán)境相似的折射率,不易在明視野之下看清楚。利用暗視野提高樣品本身與背景之間的對比,能獲得其他光學(xué)顯微鏡無法比擬的觀察效果。
在顯微鏡不斷發(fā)展與革新的同時,顯微攝影作為一門實用與藝術(shù)價值兼具的獲取影像的手段,也在不斷發(fā)生變化。在經(jīng)歷黑白膠片、彩色膠片顯微攝影后,隨著數(shù)碼影像技術(shù)的發(fā)展,顯微攝影已步入數(shù)碼時代。