白血病細(xì)胞術(shù)外周血細(xì)胞檢測臨床意義

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摘要：目的探討急性白血病（AL）患者應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）進(jìn)行外周血細(xì)胞檢測的臨床意義。方法2016年1月—2018年6月期間對136例AL患者進(jìn)行FCM外周血細(xì)胞檢測和骨髓形態(tài)學(xué)檢測，分析FCM外周血細(xì)胞檢測對微小殘留?。∕RD）的診斷效能，分析急性髓系白血?。ˋML）患者、急性淋巴白血病（ALL）患者M(jìn)RD陽性與復(fù)發(fā)率的關(guān)系。結(jié)果FCM檢測對AML患者M(jìn)RD的診斷的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確度分別為98.0%、52.0%、80.0%、92.9%、82.4%；對ALL患者M(jìn)RD的診斷的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確度分別為93.0%、63.2%、85.1%、80.0%、83.8%。對AL患者隨訪1年，AML組、ALL組MRD陽性患者復(fù)發(fā)率均高于MRD陰性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論FCM診斷外周血MRD具有較高的敏感性和準(zhǔn)確度，在AL患者化療后復(fù)發(fā)的評價中具有較高的臨床價值。

關(guān)鍵詞：急性白血病；流式細(xì)胞術(shù)；外周血；骨髓穿刺；復(fù)發(fā)

急性白血?。╝cuteleukemia，AL）是臨床常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，主要病理特點為骨髓中異常原始細(xì)胞和幼稚細(xì)胞大量增殖，并抑制骨髓的造血功能[1]。AL如不能有效治療，患者的平均生存時間僅為3個月，嚴(yán)重者甚至在確診后數(shù)日內(nèi)死亡[2]。近年來，隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，AL的治療方案不斷更新，治療效果也明顯提高，初診AL的緩解率也較前提高。但在實際的臨床工作中，仍有部分患者緩解后還會復(fù)發(fā)。目前的研究認(rèn)為，完成治療后，患者體內(nèi)微小殘留?。╩inimal-residualdisease，MRD）的存在是AL復(fù)發(fā)的主要因素[3]。檢測AL患者M(jìn)RD對于判斷預(yù)后，指導(dǎo)治療具有重要意義[4]。目前，國內(nèi)多主張應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry，F(xiàn)CM）檢測骨髓樣本的MRD，但骨髓穿刺創(chuàng)傷性大，且取得的標(biāo)本僅能反應(yīng)該部分骨髓的狀況[5]。該研究對2016年1月—2018年6月期間收治的136例AL患者應(yīng)用FCM檢測外周血MRD，以探討AL患者應(yīng)用FCM進(jìn)行外周血細(xì)胞檢測的臨床意義?，F(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇該院血液科收治的AL患者136例，所有患者均符合WHO制定的AL診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)[6]；且初次診斷為AL，并排除急性早幼粒細(xì)胞白血病和其他血液系統(tǒng)疾病，均無白血病史，無其它惡性腫瘤及心肝腎嚴(yán)重器質(zhì)性疾病，入組前未接受白血病的相關(guān)治療。急性髓系白血?。╝cutemyeloidleukemia，AML）患者74例，男41例，女33例，年齡24～67歲，平均（41.8±9.2）歲；急性淋巴白血?。╝-cutelymphoblasticleukemia，ALL）62例，男35例，女27例，年齡22～68歲，平均（40.5±8.7）歲。所有入選研究對象對該研究均知情同意，并簽署協(xié)議書。

1.2方法

AML組接受MA或HA化療方案（米托蒽醌/高三尖杉酯堿聯(lián)合阿糖胞苷）誘導(dǎo)緩解；ALL組接受VDLP化療方案（長春新堿、柔紅霉素、左旋門冬酰胺酶、潑尼松）誘導(dǎo)緩解，所有受試者均化療結(jié)束后3d內(nèi)抽取上午空腹靜脈血4mL，EDTA-2K抗凝，分別置入由異硫氰酸熒光素、多甲藻葉綠素蛋白、藻紅蛋白、別藻青蛋白免疫標(biāo)記的試管內(nèi)進(jìn)行免疫分型檢測，每個試管均加入有核細(xì)胞100萬個，根據(jù)患者的病變特點選擇合適的單克隆抗體。收集不少于10萬個有核細(xì)胞進(jìn)行分析，應(yīng)用EPICS-ALTRA型流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞收集，應(yīng)用BECKMAN-COULTER公司提供的配套軟件分析。依據(jù)原始細(xì)胞抗原的表達(dá)情況（表達(dá)跨系與否、同步與否、強弱情況、是否丟失）判定是否MRD，MRD含量≥0.01%則判斷為陽性，＜0.01%判斷為陰性。對所有受試者進(jìn)行骨髓穿刺，抽取骨髓液涂片8張，吉姆薩-瑞氏染色，顯微鏡下分類200個細(xì)胞，根據(jù)形態(tài)進(jìn)行分類計數(shù)，如原始、幼稚淋巴細(xì)胞占骨髓有核細(xì)胞的百分比＞5%時則判定為復(fù)發(fā)[6]。以骨髓細(xì)胞學(xué)形態(tài)改變（增生1級或2級；原始細(xì)胞數(shù)量增加≥20%）作為MRD診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，評價FCM檢測對MRD的診斷效能。

1.3統(tǒng)計方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析統(tǒng)計數(shù)據(jù)，該研究主要數(shù)據(jù)為計數(shù)資料，以百分率表示，F(xiàn)CM檢測的MRD陽性和陰性患者復(fù)發(fā)率的比較采用校正χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1FCM外周血檢測對MRD的診斷效能

所有AL患者中骨髓像檢測MRD陽性92例，其中陰性AML患者49例，ALL患者43例，F(xiàn)CM檢測對AML患者M(jìn)RD的診斷的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確度分別為98.0%、52.0%、80.0%、92.9%、82.4%；對ALL患者M(jìn)RD的診斷的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確度分別為93.0%、63.2%、85.1%、80.0%、83.8。見表1、表2。

2.2AL患者M(jìn)RD陽性與復(fù)發(fā)率的關(guān)系

對AL患者隨訪1年，AML組、ALL組MRD陽性患者復(fù)發(fā)率（73.5%、69.8%）均高于MRD陰性患者（32.0%、26.3%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3討論

AL患者是威脅人類健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來隨著醫(yī)療水平的飛速提高和藥物研究不斷深入，該病首次化療緩解率明顯提高，絕大多數(shù)白血病細(xì)胞經(jīng)過誘導(dǎo)治療后能夠被殺死，但仍難以達(dá)到徹底清除的高度，仍有部分患者化療緩解后復(fù)發(fā)[7]。MRD的存在是AL患者復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素，化療后檢測MRD水平對于評價療效、預(yù)后判斷均具有重要意義。目前，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測是AL診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，也是療效評價的常用指標(biāo)，但骨髓穿刺取得的標(biāo)本僅反映該區(qū)域的骨髓情況，且當(dāng)患者體內(nèi)白血病細(xì)胞含量超過1%才能檢測出來[8]。雖然骨髓穿刺液中含有較高比例的白血病細(xì)胞，但骨髓穿刺過程往往會發(fā)生血液稀釋并導(dǎo)致MRD測定值降低，血液科醫(yī)師可能過低估計患者的MRD水平，并可能由此導(dǎo)致臨床決策的失誤。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，AML患者化療后白血病細(xì)胞在骨骼中的分布存在一定異質(zhì)性，因此，骨髓液MRD檢測為陰性也有可能是骨髓穿刺未穿到白血病細(xì)胞駐留的部位所致[9]。AL患者M(jìn)RD在外周血中會有所體現(xiàn)，采集外周血進(jìn)行MRD檢測可全面反映AL患者的預(yù)后，且外周血標(biāo)本獲取方便，創(chuàng)傷小，患者容易接受；檢測時干擾細(xì)胞少，分析MRD異常免疫表型會更準(zhǔn)確。FCM是一種綜合了電子學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)、細(xì)胞化學(xué)等多種學(xué)科技術(shù)的細(xì)胞檢測方法，具有檢測方便、速度快、敏感度和特異性高等優(yōu)勢，可在細(xì)胞水平辨認(rèn)白血病細(xì)胞的大小、顆粒和熒光特征，對AL患者外周血中MRD細(xì)胞進(jìn)行相對和絕對計數(shù)，是檢測AL患者M(jìn)RD的理想手段[10-11]。Zeijlemaker等[12]研究也認(rèn)為應(yīng)用FCM計數(shù)進(jìn)行外周血MRD檢測可能替代骨髓液檢測，成為評價AML患者化療后復(fù)發(fā)情況的有效方法。有關(guān)學(xué)者[13]的研究對比分析了AL患者外周血和骨髓液中的MRD水平，發(fā)現(xiàn)不同病理類型、不同化療方案患者上述測定值可能會發(fā)生變化，但二者會保持一定的比例關(guān)系。另有研究[14]也認(rèn)為ALL患者外周血和骨髓MRD檢測有較好的一致性，外周血MRD檢測可用于ALL患者預(yù)后的評價。盡管AL患者（尤其AML患者）化療后白血病細(xì)胞在全身骨骼分布中存在異質(zhì)性，但只要MRD細(xì)胞由骨髓釋放入血液，都可通過FCM計數(shù)檢測出。該研究結(jié)果顯示，AML組、ALL組MRD陽性患者復(fù)發(fā)率（73.5%、69.8%）均高于MRD陰性患者（32.0%、26.3%）（P<0.05），與Zeijlemaker等報道相似：誘導(dǎo)治療1年后的累計復(fù)發(fā)率，PBmrd陰性患者為29%，PBmrd陽性患者為89%(P<0.001)。mrd陰性患者3年OS為52%，mrd陽性患者3年OS為15%(P=0.034)。有研究[15]檢測了115例AML患者外周血MRD情況，發(fā)現(xiàn)外周血MRD測定值較高的AML患者長期預(yù)后相對較差。該研究也發(fā)現(xiàn)MRD陽性表達(dá)的AML、ALL患者，其復(fù)發(fā)率也顯著高于同組的MRD陰性表達(dá)患者，表明MRD陽性可能與骨髓中白血病細(xì)胞的存在有密切關(guān)系，但該研究隨訪時間較短，至隨訪結(jié)束仍有部分MRD陽性患者骨髓細(xì)胞形態(tài)檢測未找到復(fù)發(fā)的充足依據(jù)。到目前為止得出的實驗數(shù)據(jù)已提示MRD陽性的AL患者存在高復(fù)發(fā)風(fēng)險，MRD是反應(yīng)AL患者預(yù)后的重要因素。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)MRD水平＞0.01%的AL患者，其3年復(fù)發(fā)率是＜0.01%患者的3倍以上，并認(rèn)為化療后MRD檢測持續(xù)陰性可停止治療，如持續(xù)陽性則考慮進(jìn)一步治療。綜上所述，F(xiàn)CM診斷外周血MRD具有較高的敏感性和準(zhǔn)確度，在AL患者化療后復(fù)發(fā)的評價中具有較高的臨床價值。

作者：姚聲盛 劉小敏 楊曉婷 單位：深圳市龍華區(qū)中心醫(yī)院檢驗科